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| 产地 | 上海 |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-CM1019 |
| 用途 | 科研实验 |
| 包装规格 | 100管/48样 |
| 纯度 | 电询% |
| CAS编号 | |
| 是否进口 |
还原糖含量试剂盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
测定原理:
加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:8mL×1瓶 ,4℃保存;
测定步骤
| 步骤序号 | 操作步骤 | 操作要点 | 注意事项 |
| 1 | 实验准备 | 1. 试剂盒组分(R1、R2、标准品、质控品)室温平衡 15-20 分钟; 2. 处理待测样本(血清 / 血浆 / 匀浆等),按需稀释; 3. 校准微量加样枪,设置酶标仪检测波长 | 1. 试剂避免反复冻融; 2. 样本无溶血、脂血; 3. 吸头一次性使用 |
| 2 | 微量加样 | 反应板各孔加样(单孔用量): - 空白孔:稀释液 20μL + R1 100μL; - 标准 / 质控孔:标品 / 质控品 20μL + R1 100μL; - 样本孔:样本 20μL + R1 100μL;轻1. 严格控制温育温度与时间; 2. 反应板加盖防液体蒸发轻混匀,室温孵育 5 分钟 | 1. 加样顺序不可颠倒; 2. 吸头勿接触孔壁,防止挂壁; 3. 避免试剂交叉污染 |
| 3 | 温育反应 | 各孔加 R2 20μL,混匀后 37℃温育 10-15 分钟(按说明书调整) | 1. 严格控制温育温度与时间; 2. 反应板加盖防液体蒸发 |
| 4 | 终止反应 | 加终止液 20μL,轻柔混匀 | 1. 终止液为强酸 / 强碱,需戴手套操作; 2. 快速加样,保证各孔反应同步终止 |
| 5 | 吸光度测定 | 酶标仪以空白孔调零,测定各孔 OD 值 | 1. 测定前确认孔底无气泡、污渍; 2. 终止反应后 10 分钟内完成检测 |
| 6 | 结果计算 | 1. 计算 ΔOD=OD 样本 / 标品 - OD 空白; 2. 以标品浓度为横坐标、ΔOD 为纵坐标绘制标准曲线; 3. 样本浓度 = 曲线查得浓度 × 稀释倍数 | 1. 标准曲线 R2≥0.99; 2. 质控结果需在合格范围内 |
| 7 | 实验收尾 | 1. 按生物安全规范处理反应废液2. 剩余试剂密封后冷藏保存; 3. 清洗反应板 / 器材 | 1. 试剂开封后尽快用完; 2. 废弃物分类处置,避免污染 |
生化试剂盒的核心分类
按检测原理和目标物类型,可分为以下几大类,覆盖多数实验场景:
1. 代谢物检测试剂盒用于检测血tang、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、尿酸、乳酸、丙酮酸等小分子代谢物,原理多为终点比色法 / 速率比色法。例如血tang试剂盒通过葡萄糖氧化酶(GOD)- 过氧化物酶(POD)偶联反应,生成有色物质,吸光度与葡萄糖浓度正相关。
2. 酶活性检测试剂盒适用于 SOD、CAT、POD、LDH、ALT、AST 等酶活性测定,以速率法为主。通过监测酶促反应过程中底物或产物的吸光度变化速率,计算酶活性单位(U)。比如 SOD 试剂盒利用氮蓝四唑(NBT)光还原法,SOD 抑制 NBT 还原的程度与酶活性相关。
3. 蛋白定量试剂盒包括 BCA、Bradford、Lowry 法试剂盒,其中微量 BCA 试剂盒适合样本量少的场景。BCA 法基于碱性条件下蛋白与 Cu2?结合,还原 BCA 试剂生成紫色复合物,在 562nm 处有特征吸收峰。
4. 离子检测试剂盒用于检测钙、磷、钾、钠等无机离子,如钙试剂盒通过钙与偶氮砷 Ⅲ 结合生成有色络合物,进行比色定量。