人（Human）神经元烯醇化酶（NSE）ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-H203

产品规格：48/96T

一、产品概述
上海笃玛生物科技有限公司是专注于生命科学领域的高科技企业，秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，致力于为 科研工作者提供高质量的生物学试剂及解决方案。本试剂盒是公司核心产品线之一，采用自主研发的高特异性抗体对，基于经典的双抗体夹心法原理构建，可精准定量检测样本中的含量。

二、检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA技术：将特异性捕获抗体预包被于酶标板微孔内；实验时，向微孔中加入标准品或待测样本，样本中的[检测指标]会与包被抗体特异性结合；洗涤去除未结合的杂蛋白后，加入生物素标记的检测抗体，形成“包被抗体-目标抗原-检测抗体”的免疫复合物；随后加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（HRP），生物素与链霉亲和素发生特异性结合，使HRP牢固结合于免疫复合物上； 加入TMB显色底物，HRP催化底物发生显色反应，颜色深浅与样本中[检测指标]的浓度呈正相关。通过酶标仪在450nm波长处测定各孔OD值，结合标准曲线即可计算出待测样本的[检测指标]浓度。

三、试剂盒组分
本试剂盒包含完成一次ELISA检测所需的全部核心组分，各组分经严格质检，确保实验可靠性，具体如下：

四、样本处理
1. 血清样本：采集静脉血后，室温静置2-4小时，3000rpm离心10分钟，收集上层血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
2. 血浆样本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即轻轻颠倒混匀，3000rpm离心10分钟，收集上层血浆，-20℃或-80℃保存。
3. 组织培养上清：细胞培养完成后，3000rpm离心5分钟，去除细胞碎片，收集上清液，-20℃保存。
4. 细胞/组织裂解液：取适量细胞或组织样本，加入预冷的裂解液，冰浴匀浆后，4℃、12000rpm离心15分钟，收集上清液，-80℃保存。
5. 所有样本在检测前需恢复至室温，震荡混匀，若有沉淀需再次离心去除，避免影响检测结果。根据样本实际情况，可使用样本稀释液进行适当稀释，确保检测浓度落在标准曲线范围内。

六、结果计算
1. 首先计算每个标准品、空白孔及样本孔的平均OD值（复孔检测时），空白孔OD值作为阴性对照，用于扣除背景干扰。
2. 以标准品浓度为横坐标（X轴，对数坐标），对应的OD值为纵坐标（Y轴，线性坐标），使用专业绘图软件（如Excel、GraphPad Prism）绘制标准曲线，计算回归方程（R²值应≥0.99，确保标准曲线的可靠性）。
3. 将扣除背景后的样本OD值代入回归方程，计算出样本中[检测指标]的初步浓度，再根据样本的稀释倍数计算出样本的实际浓度。

七、试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度： 检测浓度如资料所示。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月

八、储存与运输
1. 试剂盒未开封时，所有组分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷冻，其中标准品冻干品可置于-20℃长期保存。
2. 试剂盒开封后，预包被酶标板需密封防潮保存，剩余试剂需按原储存条件保存，避免反复冻融，开封后建议在1个月内用完。
3. 运输过程采用冷链运输（2~8℃），避免高温、剧烈震荡，确保产品性能稳定。

九、注意事项
实验前请仔细阅读本说明书，严格按照实验步骤操作，确保实验条件（温度、孵育时间）符合要求。

十、ELISA实验小科普