猪（Porcine）中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-P739４
产品规格：48/96T
上海笃玛生物坚持技术为本、品质先行。试剂盒依托经典酶联免疫吸附实验原理搭建体系，持续优化抗体配对与反应缓冲体系，降低非特异性干扰；企业恪守标准化生产与多重出厂检测原则，兼顾技术创新与实验实用性，持续为高校实验室、科研平台提供可靠的蛋白定量检测工具。

抗原与抗体特异性结合 抗原只能和对应的特异性抗体相互结合，具有高度专一性。 酶的高效催化显色反应 通常使用 HRP 辣根过氧化物酶作为标记酶，能够催化底物产生肉眼可见的颜色变化。
ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒的组成

ELISA试剂盒标准操作流程（双抗体夹心为列）
ELISA 核心原理基于抗原与抗体的特异性结合以及酶高效催化显色反应，双抗体夹心 ELISA 采用一对识别抗原不同位点的配对抗体，预包被在微孔板内的捕获抗体结合样本中的靶抗原，再与生物素化检测抗体形成夹心复合物，通过 HRP 标记链霉亲和素结合生物素完成信号标记，HRP 催化 TMB 底物产生显色反应，抗原浓度越高显色越深，酶标仪测定吸光度值，结合标准曲线即可实现靶抗原定量检测。

样本前处理
ELISA 样本前处理原理是通过离心去除样本中的细胞碎片、沉淀颗粒等杂质，避免杂质干扰抗原抗体结合与造成非特异性吸附，根据样本抗原浓度进行适度稀释，使待测物浓度落在试剂盒标准曲线有效检测区间内，同时减少样本基质中的蛋白酶、抑制物对免疫反应的干扰，维持反应体系稳定，保障后续抗原抗体特异性结合顺利开展，降低实验背景，提升检测结果准确性。

加样与孵育
加样是按照实验排布依次向微孔板加入标准品与待测样本，保证加样速度、体积统一，减少操作误差，孵育过程为抗原与固相捕获抗体提供适宜温度与充足反应时间，促进二者发生特异性结合，孵育环境保持稳定，避免液体蒸发影响体系浓度，反应结束后通过洗板去除未结合的游离物质，减少非特异性吸附，为后续免疫反应奠定基础。
洗板（核心关键步骤）
洗板是利用洗涤液冲洗微孔，去除孔内未结合的游离抗原、多余抗体以及各类杂质，减少非特异性吸附从而降低背景值，每一轮孵育结束后均需要洗板，常规操作洗板 5 次，每次加入洗涤液充分浸润 30 秒左右，甩干并在吸水纸上拍干，避免残留洗涤液稀释后续反应试剂，全程保持操作一致性，严格把控洗板次数与浸泡时间， 程度减少干扰物质，保障显色结果真实可靠。

加酶结合物与二次孵育
向微孔板加入 HRP 标记链霉亲和素，链霉亲和素能够与免疫复合物上的生物素特异性结合，使标记酶富集在夹心复合物上完成信号标记，二次孵育提供适宜温度与充足反应时间，促进二者充分结合，孵育完成后充分洗板去除未结合的游离酶结合物，防止多余酶造成背景升高，保证后续显色强度和靶抗原浓度呈良好对应关系。
二次洗板
二次洗板是酶结合物孵育结束后的关键净化步骤，主要用于 洗脱微孔内未成功结合生物素的游离 HRP 酶标试剂、残留杂蛋白与反应体系杂质，杜绝游离酶残留引发的非特异性底物催化反应，有效降低实验背景干扰、规避假阳性结果。规范操作下全程洗涤 5 次，每次加入洗涤液充分浸润孔底与孔壁 30 秒，使残留杂质充分溶解洗脱，随后 弃液、吸水纸拍干孔内残留液体，避免稀释后续底物试剂、破坏反应体系平衡，精准保障后续显色强度仅与特异性结合的夹心免疫复合物数量成正比，大幅提升 ELISA 检测的精准度与重复性。
底物显色
向微孔内加入 TMB 底物溶液，在适宜温度条件下避光开展反应，固定在免疫复合物上的 HRP 能够催化底物发生氧化反应并呈现蓝色，样本内靶抗原含量越高，结合的酶分子数量越多，显色就越深；需要统一控制显色时长，防止显色不足或者过度饱和影响线性关系，整个过程避光操作，避免底物自发氧化产生本底颜色干扰实验结果，显色完成后及时加入终止液结束酶促反应。
终止反应与读数
加入终止液可以快速改变反应体系酸碱度，直接抑制 HRP 酶活性，立刻终止酶促显色反应，孔内蓝色产物随之转变为稳定的黄色，保证各孔显色程度不再发生变化，消除因显色时长差异带来的误差；终止完成后需在规定时间内使用酶标仪检测吸光度，选择 450nm 为主检测波长，可搭配 630nm 参考波长校正孔板背景与光学干扰，读取的 OD 值将用于构建标准曲线，进而换算出样本中靶抗原浓度。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值，剔除复孔中偏差过大的异常数据，计算各组复孔平均 OD 值，扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度；以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线；将样本校正 OD 值代入曲线公式，算出稀释后样本浓度，再乘以样本预先设置的稀释倍数，最终得到原始样本中靶抗原真实浓度，同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度（ 检测限）：试剂盒能够稳定检出的 抗原浓度，数值越低代表试剂盒检测微量样本的能力越强。
2.线性范围：检测信号与抗原浓度保持良好线性对应的浓度区间，区间越宽，可直接检测的样本浓度范围越大，减少多次稀释操作。
3.准确度（回收率）：通过加标回收试验验证，实测浓度和理论浓度的吻合程度，反映检测结果贴近真实值的水平。
4.精密度：分为板内精密度与板间精密度，用变异系数 CV 表示，体现同一标本多次检测结果的重复性，变异系数越小，实验稳定性越好。
5.特异性：评估试剂盒与同源类似物质发生交叉反应的程度，交叉反应越低，越不容易出现假阳性。
6.稳定性：包含储存稳定性、开瓶稳定性、热加速稳定性，考察试剂在规定储存条件下性能维持不变的时长。
7.平行性：高浓度样本梯度稀释后，稀释样本曲线与标准曲线趋势保持一致，证明样本基质不会明显干扰检测。
结果计算
汇总各组标准品与待测样本的吸光度数据，剔除复孔中偏差较大的异常数值并计算平均 OD 值，扣除空白孔吸光度得到校正 OD 值，以标准品浓度为横坐标、校正 OD 值为纵坐标采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线并检验拟合相关系数，随后将待测样本校正 OD 值代入曲线方程反算出稀释后浓度，再乘以实验设置的样本稀释倍数得到原始样本中待测物真实浓度，若样本计算浓度超出标准曲线有效检测区间，则需要调整稀释比例重新检测以保障结果可靠。

（图片仅供参考）
售后服务
上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系我们的技术顾问，我们将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。

科普：

ELISA 全称酶联免疫吸附试验，是一种基于抗原、抗体特异性免疫结合，并结合酶促显色反应的检测技术。利用 96 孔微孔板作为反应载体，根据检测对象不同分为间接法、双抗体夹心法、竞争法等模式，既能定性判断样本中是否存在目标物质，也能依靠颜色深浅定量分析浓度。该技术操作简便、成本适中，广泛用于临床病原体检测、蛋白与激素测定、食品安全毒素筛查、生物医药实验等诸多领域，实验全程多次洗板是去除非特异性结合、保证结果准确的关键。