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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12148 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |

ELISA 双抗夹心法适合检测大分子抗原,实验中样本抗原需要同时能识别两种不同表位的抗体才能形成夹心复合物,若抗原表位被破坏就会造成检测失效,整个过程每一步孵育、洗板操作都要严格把控,标准品与待测样本保持同等处理条件,最终通过颜色信号强弱反映样本内目标抗原的含量高低。
洗板(核心关键步骤)
洗板利用洗涤缓冲液冲洗酶标板,洗去孔内未发生结合的游离试剂与杂质,洗板完成后充分拍干孔板残留液体,残留洗涤液会稀释后续反应试剂,造成数据偏差;整块板洗板次数、浸泡时间要保持统一,以此降低孔与孔之间的实验误差。
二次洗板
二次洗板重点清除游离的酶标记结合物,要把控拍干力度,孔内不能留存洗板液,也不能让孔膜出现干燥,孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附,进而造成整体背景异常升高,直接干扰显色结果的真实性。
底物显色
向微孔内加入 TMB 底物溶液,在适宜温度条件下避光开展反应,固定在免疫复合物上的 HRP 能够催化底物发生氧化反应并呈现蓝色,样本内靶抗原含量越高,结合的酶分子数量越多,显色就越深;需要统一控制显色时长,防止显色不足或者过度饱和影响线性关系,整个过程避光操作,避免底物自发氧化产生本底颜色干扰实验结果,显色完成后及时加入终止液结束酶促反应。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
汇总各组标准品与待测样本的吸光度数据,剔除复孔中偏差较大的异常数值并计算平均 OD 值,扣除空白孔吸光度得到校正 OD 值,以标准品浓度为横坐标、校正 OD 值为纵坐标采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线并检验拟合相关系数,随后将待测样本校正 OD 值代入曲线方程反算出稀释后浓度,再乘以实验设置的样本稀释倍数得到原始样本中待测物真实浓度,若样本计算浓度超出标准曲线有效检测区间,则需要调整稀释比例重新检测以保障结果可靠。
公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
科普:
作为固相免疫定量手段,ELISA 区别于单纯的蛋白定性实验,它依靠免疫复合物在固相载体上的富集实现信号转换,体系中游离的干扰物质会通过洗板步骤被剥离,仅保留特异性结合的组分参与后续酶促反应;该技术的灵敏度很大程度取决于标记酶的信号放大能力,即便极低浓度的靶蛋白也能够产生可检测的光信号,但基质干扰、蛋白降解以及抗体的交叉反应,都容易带来假阳性或假阴性,因此实验过程中需要同步设置各类对照孔,以此评判整套检测体系是否可靠。