兔（Rabbit）免疫球蛋白G(IgG)ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-R12151
产品规格：48/96T
上海笃玛生物主营科研 ELISA 试剂盒及各类实验耗材，兼具试剂销售与实验外包服务，自有原料生产和严格质控，性价比优于进口试剂，售后技术响应迅速，服务各大高校、医院科研端，产品 科研使用。
ELISA 依托抗原抗体特异性结合与酶催化显色反应完成检测，特异性与灵敏度较好，可批量检测样本，操作便捷、设备门槛低、花费适中，能定性筛查也可定量测算浓度，适配多种生物样本；但易受样本状态影响，检测区间有限，结果精度弱于化学发光，多用于科研检测。

ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒的组成

ELISA试剂盒标准操作流程（双抗体夹心为列）

酶标板预先包被捕获抗体并封闭非特异性位点，加入标准品和待测样本孵育，抗原与板上抗体结合，洗板后加入酶标二抗孵育形成夹心复合物，再次洗涤去除多余抗体，加入底物避光显色，终止后用酶标仪读取吸光度，参照标准曲线计算抗原浓度。

样本前处理


加样与孵育
将标准品和处理好的样本依次加入酶标板，恒温孵育促使抗原与固相捕获抗体充分结合，结束后弃去孔内液体。

洗板（核心关键步骤）

每孔加满洗涤液后弃去，反复洗涤数次，倒扣拍干残留液体，去除未结合杂质，减少非特异性干扰。



加酶结合物与二次孵育
向微孔板中加入配制完成的酶标记检测抗体，轻柔晃动酶标板保证液体均匀覆盖孔底，置于规定温度环境下孵育适宜时长，让酶标抗体能够精准结合抗原的另一抗原位点，构建捕获抗体 - 待测抗原 - 酶标抗体的夹心复合物；孵育结束后倒掉孔中液体，随即开展洗板操作， 冲散并清除没有发生特异性结合的游离酶结合物，规避多余试剂干扰后续显色结果。

二次洗板

二次洗板重点清除游离的酶标记结合物，要把控拍干力度，孔内不能留存洗板液，也不能让孔膜出现干燥，孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附，进而造成整体背景异常升高，直接干扰显色结果的真实性。

底物显色

向微孔内加入 TMB 底物溶液，在适宜温度条件下避光开展反应，固定在免疫复合物上的 HRP 能够催化底物发生氧化反应并呈现蓝色，样本内靶抗原含量越高，结合的酶分子数量越多，显色就越深；需要统一控制显色时长，防止显色不足或者过度饱和影响线性关系，整个过程避光操作，避免底物自发氧化产生本底颜色干扰实验结果，显色完成后及时加入终止液结束酶促反应。
终止反应与读数
加入终止液可以快速改变反应体系酸碱度，直接抑制 HRP 酶活性，立刻终止酶促显色反应，孔内蓝色产物随之转变为稳定的黄色，保证各孔显色程度不再发生变化，消除因显色时长差异带来的误差；终止完成后需在规定时间内使用酶标仪检测吸光度，选择 450nm 为主检测波长，可搭配 630nm 参考波长校正孔板背景与光学干扰，读取的 OD 值将用于构建标准曲线，进而换算出样本中靶抗原浓度。

数据处理

先整理所有孔的 OD 数值，剔除复孔中偏差过大的异常数据，计算各组复孔平均 OD 值，扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度；以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线；将样本校正 OD 值代入曲线公式，算出稀释后样本浓度，再乘以样本预先设置的稀释倍数，最终得到原始样本中靶抗原真实浓度，同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。

ELISA试剂盒核心性能评价指标

1.灵敏度：试剂盒能够检出的 待测物浓度，数值越低，检出能力越强。

2.精密度：分为批内、批间变异系数 CV，反映结果重复性，CV 值越小，重复检测数据越接近。3.特异性：看试剂盒与其他相近物质的交叉反应，交叉反应越低，越不容易误判。

4.回收率：向样本中加入已知量目标物，实测值和理论值的比值，体现样本基质对检测的干扰程度。

5.线性范围：试剂盒可以准确检测的浓度区间，样品浓度要落在该区间内，数据才可靠。

6.稳定性：试剂盒在规定储存条件下，性能可以维持的有效期。

结果计算

汇总各组标准品与待测样本的吸光度数据，剔除复孔中偏差较大的异常数值并计算平均 OD 值，扣除空白孔吸光度得到校正 OD 值，以标准品浓度为横坐标、校正 OD 值为纵坐标采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线并检验拟合相关系数，随后将待测样本校正 OD 值代入曲线方程反算出稀释后浓度，再乘以实验设置的样本稀释倍数得到原始样本中待测物真实浓度，若样本计算浓度超出标准曲线有效检测区间，则需要调整稀释比例重新检测以保障结果可靠。

（图片仅供参考）
售后服务
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