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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12153 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
ELISA试剂盒的四大原理

预先在微孔板上固定捕获分子,封闭板面多余吸附空位;加入标准试样与待测试样恒温孵育,目标物质和固相分子结合后洗板;投入酶标记分子再次恒温静置,形成夹心分子结构,二次洗涤除去游离物质;添加显色底物避光反应,适时终止显色,仪器读取光度数值,对照标准曲线计算样品内目标物质含量。
洗板(核心关键步骤)
将梯度标准样品、预处理完毕的待测样品依次加入微孔板孔洞,放置恒温环境静置培育,让目标物质与板底固定分子充分结合,孵育结束倒出孔内液体。
二次洗板
二次洗板重点清除游离的酶标记结合物,要把控拍干力度,孔内不能留存洗板液,也不能让孔膜出现干燥,孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附,进而造成整体背景异常升高,直接干扰显色结果的真实性。
底物显色
向微孔内滴加底物液体,置于避光环境静置反应,酶会催化底物逐步产生颜色变化,样品内目标物质越多,呈现的颜色色调越深;显色程度达标后,加入终止液停止催化反应,固定颜色效果,随后使用仪器读取光度数据。
终止反应与读数
加入终止液可以快速改变反应体系酸碱度,直接抑制 HRP 酶活性,立刻终止酶促显色反应,孔内蓝色产物随之转变为稳定的黄色,保证各孔显色程度不再发生变化,消除因显色时长差异带来的误差;终止完成后需在规定时间内使用酶标仪检测吸光度,选择 450nm 为主检测波长,可搭配 630nm 参考波长校正孔板背景与光学干扰,读取的 OD 值将用于构建标准曲线,进而换算出样本中靶抗原浓度。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
售后服务
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科普:
ELISA 全称酶联免疫吸附测定,是生物实验室常用检测手段。核心原理是专属生物分子精准配对结合,借助酶的催化作用让显色试剂产生色差,色彩深浅对应目标物质含量高低。该技术批量检测效率高、上手难度小、适用试样范围广、成本实惠,多用于各类生物组分检测;但样品状况、操作手法都会影响最终数据,检测精度存在上限,普遍运用于各类基础科研领域。