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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12154 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
ELISA试剂盒的四大原理

预先在微孔板上固定捕获分子,封闭板面空余吸附位点;加入标准样品与待测样品恒温静置反应,目标物质和固相分子结合后进行 洗板;加入酶标记试剂再次恒温孵育,形成夹心分子结构后开展二次洗板;添加底物避光显色,之后终止催化反应,仪器读取光度数值,对照标准曲线核算样品中目标物质含量。
洗板(核心关键步骤)
往每个孔洞加满洗涤液后倒掉,重复多次操作,将微孔板倒扣拍打排尽残留液体,冲刷掉没有发生特异性结合的游离物质,减少无效吸附引发的数据误差。
二次洗板
酶标记试剂孵育结束后倒出孔中液体,多次灌入洗涤液冲刷孔壁, 清除未参与结合的游离试剂,倒扣板子拍干残留液体,防止多余试剂留存干扰后续显色过程。
底物显色
向微孔内加入底物液体,置于避光环境静置反应,酶会催动底物慢慢产生色彩变化,样品内目标物质越多,最终呈现的颜色越深;显色达到合适程度即可准备终止反应。
终止反应与读数
显色状态达标后,向所有孔洞加入终止试剂,中止酶的催化作用,稳定色彩效果。将微孔板放入光度检测仪获取吸光数值,结合标准曲线进行计算,最终得到样品内目标物质的具体含量。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
汇总各组标准品与待测样本的吸光度数据,剔除复孔中偏差较大的异常数值并计算平均 OD 值,扣除空白孔吸光度得到校正 OD 值,以标准品浓度为横坐标、校正 OD 值为纵坐标采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线并检验拟合相关系数,随后将待测样本校正 OD 值代入曲线方程反算出稀释后浓度,再乘以实验设置的样本稀释倍数得到原始样本中待测物真实浓度,若样本计算浓度超出标准曲线有效检测区间,则需要调整稀释比例重新检测以保障结果可靠。
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科普:
ELISA 中文名称为酶联免疫吸附测定,是生物实验室常用的检测方式。原理依靠专属生物分子精准配对结合,借助酶的催化作用使显色试剂产生色差,色彩深浅和目标物质含量成正比。这项技术批量检测效率高、操作入门简单、适用样本类型广泛、花费低廉,多用于各类生物组分检测;但样本状态、操作细节都会左右最终数据,检测精度存在上限,主要运用于各类基础科研场景。