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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12188 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒的组成
双抗体夹心法为 ELISA 主流检测范式,借助固相捕获分子、待测靶标组分与酶标记识别分子构筑三层夹心复合物,实现对试样中靶标组分的定量解析。
洗板(核心关键步骤)
二次洗板
二次洗板重点清除游离的酶标记结合物,要把控拍干力度,孔内不能留存洗板液,也不能让孔膜出现干燥,孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附,进而造成整体背景异常升高,直接干扰显色结果的真实性。
底物显色
加入底物工作液,于避光条件下发生酶促反应并生成有色产物,靶标组分含量与显色信号强度呈正相关,当显色信号到达设定阈值,即可开展后续操作。
终止反应与读数
添加终止液淬灭酶促催化活性,稳定显色体系;采用分光光度检测设备采集各组试样对应的吸光度值。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
售后服务
上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队,为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问,或对产品质量有异议,请及时联系我们的技术顾问,我们将在24小时内响应,为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
科普:
酶联免疫吸附测定(ELISA)是一套将固相免疫识别、酶促信号放大与光学读数相结合的蛋白定量技术,非常适合成分混杂的生物科研样本开展分析。很多检测手段需要对样品进行多步纯化,在处理过程中容易造成靶标分子流失,而 ELISA 对样品的预处理要求相对宽松,经过离心去除沉淀、适度稀释之后的细胞上清、组织裂解产物等粗样品就可以投入实验,省去冗长的提纯步骤,更加适配基础研究中大样本量的检测需求。
整套反应依托 96 孔微孔板展开,利用板材表面的固相吸附特性,把可以特异性识别靶标的捕获分子固定在孔底,形成反应的固相基底。向孔位加入待检样品后进行恒温孵育,控制合适的温度与时间,促使样品溶液中的靶标蛋白与固定分子发生特异性免疫结合。生物样本内部充斥着种类繁多的杂蛋白与小分子杂质,这些物质很容易依靠非特异性作用黏附在孔壁,拉高背景信号,掩盖真实检测信号,因此多轮严谨的洗板操作是控制实验质量的关键,洗涤缓冲液可以冲洗掉孔内游离的各类干扰组分,降低非特异吸附带来的数据偏差,减少假阳性风险。
洗板结束后,加入偶联酶的识别分子继续孵育,使其与已经被捕获的靶标蛋白完成结合配对,再次洗板清除掉体系中游离多余的标记分子,此时只有成功组装出免疫复合物的孔位才会留存带有催化活性的酶。向孔内加入显色底物之后,留存的酶会驱动底物发生生化反应,生成有色化合物,孔内颜色深浅和靶标蛋白的实际丰度形成对应关系。酶标仪记录各个孔的吸光强度,但单纯的光学读数仅代表信号高低,无法直接输出蛋白浓度,因此实验中需要同步设置一系列已知浓度的标准参照样本,依据参照样本的检测信号拟合构建标准曲线,再将待测样本的吸光值代入曲线完成运算,得到每份样品靶标蛋白的具体含量。
历经长期的技术改良,ELISA 形成直接、间接、夹心、竞争四类主流检测体系,不同体系在操作周期、信号放大水平、检出范围、适配靶标分子量上各有取舍。部分体系操作流程简洁,能够压缩整体实验时长;部分体系凭借信号放大优势,适合检测样品中含量低微的靶标蛋白;还有部分体系更适配小分子类待测物。科研人员需要结合样本来源、靶标预估表达量、实验室试剂储备、仪器配置等现实条件综合评估,选择适配的检测方案。
96 孔板的硬件设计赋予该技术突出的高通量属性,单块微孔板就可以同时处理数十份不同来源的科研样品,极大提升批量样本的检测效率。如今市面上商业化试剂盒种类丰富,整套实验流程已经高度标准化。科研团队既可以购置试剂盒,在本实验室独立完成样本上板、多次孵育洗板、显色读数、数据处理的完整流程;也可以将样本编号分装、低温妥善保存,交由第三方机构开展 ELISA 代测服务,接收包含原始吸光数据、标准曲线图表、样本浓度结果的完整实验报告,以此应对试剂不足、实验人手紧缺、缺少酶标仪等现实难题。尽管目前不断涌现出各类灵敏度更高的新型蛋白检测技术,但 ELISA 凭借成本友好、样本消耗少、实操门槛低、结果稳定性好等诸多优势,时至今日依旧在各类基础生物学蛋白定量相关的课题研究中发挥着十分重要的作用。