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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12191 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒的组成
双抗体夹心法为 ELISA 主流检测范式,借助固相捕获分子、待测靶标组分与酶标记识别分子构筑三层夹心复合物,实现对试样中靶标组分的定量解析。
洗板(核心关键步骤)
二次洗板
二次洗板重点清除游离的酶标记结合物,要把控拍干力度,孔内不能留存洗板液,也不能让孔膜出现干燥,孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附,进而造成整体背景异常升高,直接干扰显色结果的真实性。
底物显色
加入底物工作液,于避光条件下发生酶促反应并生成有色产物,靶标组分含量与显色信号强度呈正相关,当显色信号到达设定阈值,即可开展后续操作。
终止反应与读数
添加终止液淬灭酶促催化活性,稳定显色体系;采用分光光度检测设备采集各组试样对应的吸光度值。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
售后服务
上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队,为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问,或对产品质量有异议,请及时联系我们的技术顾问,我们将在24小时内响应,为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
科普:
酶联免疫吸附测定(ELISA)属于固相免疫检测范畴,它巧妙结合了免疫识别与酶催化显色两大原理,能够在不做高度纯化的前提下,对复杂生物体系当中的靶标蛋白开展定量分析。很多蛋白检测手段要求样品经过多步提纯去除杂质,操作繁琐且容易造成靶标分子损失,而 ELISA 可以直接处理经过简单前处理的粗样品,无论是细胞培养产生的上清液,还是经过裂解处理的组织样本,经过离心、分装等简单处理后就能够投入实验,大幅降低了样本前期处理的工作量。
整个实验在 96 孔微孔板上完成,微孔板的固相表面可以吸附抗体分子,以此搭建起反应的基础平台。将捕获抗体固定在孔底之后,加入待测科研样本进行恒温孵育,在合适的温度环境下,样本溶液中的靶标蛋白便可以和固定抗体发生专一的免疫结合。但样品中还存在大量无关蛋白,这些杂蛋白容易非特异性附着在孔壁之上,会抬高整体背景,造成结果失真,因此多次洗板工序是保障实验质量的重要环节。洗涤缓冲液能够冲散孔内没有结合的游离蛋白与各类干扰组分,把非特异吸附带来的负面影响降到 。
完成样本孵育与洗板之后,再引入带有酶标记的识别分子,继续进行孵育,使其与已经被捕获的靶标蛋白进行配对,结束后再次洗板,清除体系当中多余未结合的标记分子。此时只有成功形成免疫复合物的孔位,才会保留有催化活性的标记酶。向各孔加入显色底物溶液,标记酶就可以催化底物发生化学反应,生成有色产物,反应体系颜色深浅,直接对应孔内靶标蛋白的实际丰度。酶标仪会逐个采集微孔的吸光信号,但是单纯的光学读数只代表信号强弱,无法直接换算成蛋白浓度,因此实验过程中必须同步运行一整套已知浓度的标准参照样品。利用参照样品的信号数据完成曲线拟合,构建标准曲线模型,再将待测样本的吸光数值代入模型运算,就可以计算出每份样品内部靶标蛋白的具体含量。
经过长期的技术迭代,ELISA 发展出直接、间接、夹心、竞争四种主流检测模式,各类模式在操作步骤多少、检测灵敏度高低、检出下限、适配靶标类型上都存在明显差异。部分模式步骤简洁,整体耗时较短;部分模式依靠信号放大,能够识别含量极低的靶标;还有的模式更加适配小分子类物质,科研人员需要综合样本类型、靶标预估丰度、现有试剂条件等多重因素,谨慎选择相匹配的检测方案。
依托 96 孔板的载体设计,ELISA 拥有十分突出的高通量优势,单块微孔板就可以同时完成几十份样本的同步检测,极大提升批量样本的处理效率。当前商业化试剂盒品类齐全,实验流程高度标准化,科研团队既可以购置试剂,在实验室内部独立完成样本上板、孵育、洗板、显色读数的全部流程;也可以将样本做好编号分装,低温妥善保存后寄送出去,选择第三方机构的 ELISA 代测服务,由外包实验人员完成全套操作,接收包含原始吸光值、标准曲线图谱、样本浓度结果在内的完整实验报告。这种灵活的选择方式,很好解决了部分课题组试剂匮乏、人手紧张、缺少酶标仪器等现实问题。即便现在陆续出现更多新型蛋白检测技术,但 ELISA 凭借成本适中、样本消耗少、技术门槛友好等诸多优势,至今仍然广泛应用在各类基础生物学相关的蛋白分析研究当中。