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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2~8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-R12195 |
| 用途 | ELISA |
| 检测方法 | 电询 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 兔 |
| 检测限 | 电xvn |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆等 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
ELISA试剂盒的四大原理

试剂盒的组成
双抗体夹心法为 ELISA 主流检测范式,借助固相捕获分子、待测靶标组分与酶标记识别分子构筑三层夹心复合物,实现对试样中靶标组分的定量解析。
洗板(核心关键步骤)
二次洗板
二次洗板重点清除游离的酶标记结合物,要把控拍干力度,孔内不能留存洗板液,也不能让孔膜出现干燥,孔板干涸会引发不可逆的非特异吸附,进而造成整体背景异常升高,直接干扰显色结果的真实性。
底物显色
加入底物工作液,于避光条件下发生酶促反应并生成有色产物,靶标组分含量与显色信号强度呈正相关,当显色信号到达设定阈值,即可开展后续操作。
终止反应与读数
添加终止液淬灭酶促催化活性,稳定显色体系;采用分光光度检测设备采集各组试样对应的吸光度值。
数据处理
先整理所有孔的 OD 数值,剔除复孔中偏差过大的异常数据,计算各组复孔平均 OD 值,扣除空白孔 OD 值得到校正后吸光度;以标准品浓度为横坐标、对应的校正 OD 值为纵坐标,采用四参数 Logistic 模型拟合标准曲线;将样本校正 OD 值代入曲线公式,算出稀释后样本浓度,再乘以样本预先设置的稀释倍数,最终得到原始样本中靶抗原真实浓度,同时结合曲线相关系数判断本次实验数据是否有效。
ELISA试剂盒核心性能评价指标
1.灵敏度:试剂盒能够检出的 待测物浓度,数值越低,检出能力越强。
2.精密度:分为批内、批间变异系数 CV,反映结果重复性,CV 值越小,重复检测数据越接近。3.特异性:看试剂盒与其他相近物质的交叉反应,交叉反应越低,越不容易误判。
4.回收率:向样本中加入已知量目标物,实测值和理论值的比值,体现样本基质对检测的干扰程度。
5.线性范围:试剂盒可以准确检测的浓度区间,样品浓度要落在该区间内,数据才可靠。
6.稳定性:试剂盒在规定储存条件下,性能可以维持的有效期。
结果计算
售后服务
上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队,为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问,或对产品质量有异议,请及时联系我们的技术顾问,我们将在24小时内响应,为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
科普:
酶联免疫吸附测定(ELISA)依托免疫识别原理实现生物样本中靶标蛋白的定量分析,在众多基础生物研究方向中占有一席之地。区别于很多需要对样本进行高度纯化的检测手段,ELISA 可以直接处理成分复杂的生物样品,无需复杂的前期提纯步骤,大大简化了样品处理的难度。实验依托 96 孔微孔板开展,依靠板材表面的固相吸附效果,将具备识别能力的抗体固定在微孔底部,随后加入处理完毕的科研样本进行恒温孵育,营造合适的温度环境,促使样本溶液里的靶标蛋白能够和固定抗体充分发生特异性结合。孵育完成之后,洗板这一步骤起到过滤干扰的关键作用,通过洗涤缓冲液反复冲洗孔道,将孔内游离存在的蛋白分子、样本带来的各类杂质以及发生非特异性吸附的物质冲洗干净,尽可能压低背景信号,降低假阳性结果出现的概率,提升整体实验的可靠性。完成洗板之后,再投入带有酶标记的二抗分子进行 轮孵育,让二抗能够和已经结合上去的靶标蛋白完成配对,结束后再次洗板,清除掉所有没有结合的游离二抗。此时只有形成特异性免疫复合物的孔位才会留存标记酶,向孔内加入底物溶液后,标记酶就会发挥催化功能,推动底物发生化学反应,生成有色产物,溶液颜色的深浅,直接对应样本中靶标蛋白的含量高低。酶标仪会逐一读取各个微孔的吸光强度,为了把光学信号转化为具体的浓度数值,实验过程中会同步设置多组已知浓度的参照样品,利用参照样品的数据点拟合构建标准曲线,再将待测样本测得的吸光数值代入曲线模型,经过计算就可以得到每份样品靶标蛋白的实际含量。直接、间接、夹心、竞争四种主流检测模式各有侧重,有的模式操作流程简单省时,有的模式灵敏度更高适合检测低丰度蛋白,还有的模式更加适配小分子靶标,科研人员需要综合考量样本类型、靶标大致表达水平以及课题组现有的实验条件,选择 的检测方案。得益于 96 孔板的载体设计,ELISA 拥有十分突出的高通量优势,单块微孔板就可以同时处理几十份细胞培养液、组织提取液、蛋白上清等不同来源的科研样本。整套实验方案已经经过长期迭代,标准化程度很高,课题组既可以采购试剂盒在实验室内部完成全部实验操作,也可以将样本妥善分装、低温寄送,交由第三方机构提供 ELISA 代测服务,以此解决人手不足、缺少试剂盒或者设备短缺等现实困境,科研人员可以省去大量重复繁琐的实操工作,将时间更多投入到数据解读和课题后续设计当中,这也是这项技术历经多年,依旧在各类基础生物学蛋白研究中被大量使用的重要原因。