猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒

猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒

洗涤方法：
1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

  操作注意事项：
  1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
  2.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
  3.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
  4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
  5.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
  6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
  7.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
  8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
  9.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
 猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒 

样品类型（SAMPLE TYPES）：
标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。
样品采集：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒
ELISA检测试剂盒提供免费检测服务，7个工作日内出实验报告，保质保量完成委托实验，只收取试剂盒的费用，其他辅助试剂全部免费。

猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒

操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒

注：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是 加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线， 做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请 乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
猪免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫试剂盒
操作常见问题解析：
1.加样?
在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。
2.边缘效应
使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。
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Nat Med:领域重大进展，抗体成功清除婴猴体内SHIV

2016年3月23日 讯 /生物谷BIOON/ -- 俄勒冈州国家灵长类动物研究中心的科学家今天透露，将暴露在SHIV（具有HIV包膜蛋白的嵌合猴病毒）的婴猴于24小时内用抗体 ，能将病毒 清除。这项研究在Nature Medicine杂志发表，表明给暴露在SHIV的婴猴进行抗体给药能够成功清除病毒，这是科学界的重大进展。

S的非人灵长类动物可以通过母乳喂养把SHIV传染给后代，就像HIV能通过哺乳和分娩进行母婴传播。人们通常利用抗逆转录病毒 （ART），剖腹产分娩和配方奶粉喂养等各种方法阻断HIV-1的母婴传播，已将HIV的母婴传播率从1994年的25%下降到2%。虽然减少很多，但每年仍有大约20万名儿童感染，而且主要发生在ART 不成熟的发展中国家。

“我们明白母婴传播中HIV会迅速感染婴儿，所以我们要尽快 婴猴，但我们当时并不确信抗体 可以完全清除病毒。”Haigwood和同事们在婴猴暴露于病毒后 ,4,7和10天进行皮下注射中和单抗。没有抗体 的婴猴可观察到SHIV在暴露 天就在多种组织中发现。相反，在 针注射后就即刻产生影响。感染早期 抗体的注射能在 4天将病毒完全清除。即使用高敏感的方法也没有在婴猴体内任何组织中中检测到病毒。

通常情况下，迅速，在局部淋巴结扩散，并一周内传染到整个身体。在这项研究的实验模型中，新生猕猴的SHIV口腔暴露后，24小时后能在淋巴组织中检测到病毒

复制，在5至7天后能在血液中检测到。

研究表明：（1）皮下注射的抗体能迅速分布于血液和组织中，在不同位置保持中和活性，（2）抗体能有效清除病毒，与ART 的机制不同，ART是多种抗逆转录药物，能减慢HIV在体内的复制速度。

其他非人灵长类的实验表明，感染三天后再进行抗逆转录病毒 过晚，无法阻止HIV 潜藏库的建立。研究人员推荐在 一个月，分娩后的几天和母乳喂养期间进行ART 。但风险仍然存在，包括长期ART 的毒性，病毒耐药株的产生和分娩前的护理缺乏等问题。新研究报名，使用抗体 等方法可能对新生儿抑制感染方面有利。

该研究的作者承认，还有很多与的婴儿和母亲相关的问题无法解答，包括 母乳喂养的实际问题和文化层面的问题，是否抗体对人类婴儿暴露于HIV能够起作用，优化的抗体组成等问题。

对HIV暴露的新生儿进行抗体 的临床试验已在美国和南非展开。之前已有临床一期实验在HIV-1阴性的成年人中表明抗体的安全性和良好的耐受性