小鼠（Mouse）羟基丁酸-3ELISA检测试剂盒-上海笃玛生物科技有限公司

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产品展厅

小鼠（Mouse）羟基丁酸-3ELISA检测试剂盒

品牌：DUMABIO

产地：上海

型号：48/96T

货号：DM-X6759

价格： ￥1860/盒
发布日期： 2025-04-14
更新日期： 2025-04-14

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产品详请

产地	上海
保存条件	2-8°
品牌	DUMABIO
货号	DM-X6759
用途	科研实验
检测方法
保质期	6个月
适应物种
检测限
数量	999
包装规格	48/96T
标记物
样本
应用
是否进口	否

小鼠（Mouse）羟基丁酸-3ELISA检测试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6759

产品规格：【48T/96T】

一、产品概述

本小鼠羟基丁酸 - 3（3-Hydroxybutyric Acid）ELISA 检测试剂盒专为科研工作者测定小鼠样本中的羟基丁酸 - 3 含量而设计。试剂盒货号为 [具体货号]，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，规格为 96 孔板，可完成 96 次检测，适用于小鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清等多种样本类型。

二、检测原理

本试剂盒运用双抗体夹心法 ELISA 原理。在试剂盒的包被板上，预先包被了特异性针对小鼠羟基丁酸 - 3 的抗体。当加入标准品、样本时，样本或标准品中的羟基丁酸 - 3 会与包被抗体结合。之后再加入酶标记的另一种特异性识别羟基丁酸 - 3 的抗体，形成 “包被抗体 - 羟基丁酸 - 3 - 酶标抗体” 复合物。经过洗涤步骤去除未结合的物质后，加入底物进行显色反应。在一定范围内，颜色的深浅与样本中羟基丁酸 - 3 的含量呈正比关系。通过酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD 值），依据标准曲线便能精准计算出样本中羟基丁酸 - 3 的含量。

三、试剂盒组成

包被微孔板：1 块（8×12 条），保存条件为 2 - 8°C。微孔板表面已牢固包被针对小鼠羟基丁酸 - 3 的特异性抗体，用于捕捉样本中的目标物。

标准品：2 瓶（冻干品），保存于 - 20°C。使用前需严格按照说明书进行复溶，用于构建标准曲线，为样本定量提供参照依据。

样本稀释液：20 ml，储存于 - 20°C。用于稀释样本，使样本浓度适配试剂盒的检测范围，同时维持样本的稳定性，保证检测结果的可靠性。

酶标试剂：60 μl，保存温度为 - 20°C。该试剂含有酶标记的针对小鼠羟基丁酸 - 3 的特异性抗体，在检测反应中与目标物结合，参与后续的显色过程。

显色剂 A 液：6 ml，4°C 保存。作为显色反应的底物之一，与酶标试剂中的酶发生反应，产生颜色变化。

显色剂 B 液：6 ml，4°C 保存。与显色剂 A 液共同作用，在酶的催化下，通过显色反应指示样本中羟基丁酸 - 3 的含量。

终止液：6 ml，4°C 保存。用于终止显色反应，使反应结果稳定，便于酶标仪准确读取 OD 值，确保检测结果的准确性和可重复性。

浓缩洗涤液（20×）：30 ml，4°C 保存。使用时需按照比例稀释成工作洗涤液，用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，降低背景干扰，保证检测的特异性。

封板膜：2 张，用于在反应过程中密封微孔板，防止液体蒸发和外界杂质污染，维持反应体系的稳定。

说明书：1 份，详细介绍了试剂盒的组成、检测原理、操作步骤、注意事项等关键信息，是正确使用试剂盒的重要指导文件。

自封袋：1 个，方便试剂盒的收纳和保存，减少外界因素对试剂盒各组分的影响。

四、检测范围

本试剂盒对小鼠样本中羟基丁酸 - 3 的检测范围为 0.078 - 5 ng/ml。在此范围内，试剂盒能够提供高灵敏度和准确性的检测结果。若样本中羟基丁酸 - 3 的含量超出此范围，建议对样本进行适当的稀释后重新检测，以确保检测结果的可靠性。

五、样本要求

血清：采用无菌技术采集小鼠血液，将血液收集于不含抗凝剂的离心管中。室温下静置 30 - 60 分钟，待血液充分凝固后，以 3000 - 4000 rpm 的转速离心 15 分钟，小心吸取上层血清转移至新的无菌离心管中。血清样本可立即用于检测，若暂不检测，需将血清分装至无菌冻存管中，储存于 - 80°C，避免反复冻融，否则可能导致样本中目标物的降解，影响检测结果。

血浆：使用含有 EDTA 或肝素抗凝剂的采集小鼠血液。采集后，应尽快将血液以 3000 - 4000 rpm 的转速离心 15 分钟，分离上层血浆转移至无菌离心管中。血浆样本同样可立即检测，如需保存，分装后储存于 - 80°C，且避免反复冻融。注意，溶血或脂血严重的血浆样本不适合本试剂盒检测，可能会干扰检测结果的准确性。

组织匀浆：取适量小鼠组织样本，用预冷的生理盐水或 PBS 缓冲液冲洗干净，去除表面的血液和杂质。将组织剪成小块，放入匀浆器中，按照组织重量（g）：匀浆介质体积（ml） = 1:9 的比例加入适量的匀浆介质（如生理盐水、PBS 缓冲液等）。在冰浴条件下，使用电动匀浆器或手动匀浆器将组织充分匀浆。匀浆后，将匀浆液以 3000 - 4000 rpm 的转速离心 15 - 20 分钟，取上清液作为样本。若不立即检测，上清液应分装储存于 - 80°C，避免反复冻融。

细胞培养上清：收集细胞培养上清时，需确保细胞培养过程无污染且处于对数生长期。将细胞培养瓶或培养板中的上清液小心转移至离心管中，以 1500 - 2000 rpm 的转速离心 10 分钟，去除细胞碎片和杂质。取上清液立即用于检测，若需保存，同样分装后储存于 - 80°C，避免反复冻融。

六、操作步骤

准备工作：提前将试剂盒从冰箱中取出，在室温（20 - 25°C）下平衡 30 - 60 分钟。准备好所需的实验器材，如酶标仪、移液器（不同量程，如 10 μl、20 μl、100 μl、200 μl、1000 μl）、离心机、涡旋振荡器、洗板机（若使用手动洗涤，则准备多道移液器、洗瓶、吸水纸等）。确保酶标仪波长设置为 450 nm，并提前预热 30 分钟。同时，根据实验需求，配制好所需的各种工作液，如稀释后的洗涤液等。

标准品稀释：取出标准品，按照说明书要求进行复溶。复溶后，根据标准品浓度和所需的标准曲线浓度点，使用样本稀释液进行梯度稀释。一般设置 6 - 8 个浓度点，例如，若标准品原始浓度为 5 ng/ml，可依次稀释为 2.5 ng/ml、1.25 ng/ml、0.625 ng/ml、0.312 ng/ml、0.156 ng/ml、0.078 ng/ml 等。稀释过程中，需充分混匀，可使用涡旋振荡器振荡数秒。

加样：将包被微孔板从铝箔袋中取出，按照实验设计，分别向微孔板的相应孔中加入 50 μl 标准品、空白对照（加入 50 μl 样本稀释液）和处理好的样本。加样时，移液器枪头应垂直且尽量接近孔底，但不要接触孔壁，缓慢匀速地加入液体，避免产生气泡。加样过程中，要确保每孔加样量准确一致，可使用多道移液器提高加样效率和准确性。加样完成后，轻轻振荡微孔板，使液体充分混合。

温育：向每孔中加入 50 μl 酶标试剂，用封板膜密封微孔板，避免液体蒸发和外界污染。将密封好的微孔板放入 37°C 恒温培养箱中孵育 60 分钟。温育过程中，保持培养箱内温度稳定，避免频繁开启培养箱门，以免影响温育效果。

洗涤：温育结束后，小心去除封板膜，将微孔板中的液体弃去。使用洗板机进行洗涤时，按照仪器操作说明书，设置好洗涤参数，一般每孔加入 350 - 400 μl 洗涤液，洗涤 5 次，每次浸泡 1 - 2 分钟后，甩掉孔内液体。若使用手动洗涤，可使用多道移液器向每孔加入洗涤液，然后将微孔板倒置在干净的吸水纸上，用力拍干，重复洗涤 5 次，确保每孔液体被完全去除，减少非特异性结合带来的背景干扰。

显色：洗涤完成后，向每孔中依次加入 50 μl 显色剂 A 液和 50 μl 显色剂 B 液。加入显色剂后，轻轻振荡微孔板，使溶液充分混合均匀。再次将微孔板放入 37°C 恒温培养箱中避光孵育 15 - 30 分钟。在显色过程中，密切观察标准品孔的颜色变化，当颜色变化明显且呈现出预期的梯度时，即可进行下一步操作。注意，显色时间不宜过长或过短，过长可能导致颜色过深，超出酶标仪检测范围；过短则颜色不明显，影响结果判读。

终止反应：显色反应达到预期时间后，向每孔中加入 50 μl 终止液，轻轻振荡微孔板，使溶液充分混合。此时，溶液颜色会立即发生变化，由蓝色变为黄色。终止反应后，应尽快进行 OD 值测定，避免时间过长导致颜色变化影响检测结果。

读取 OD 值：立即将微孔板放入酶标仪中，在 450 nm 波长下测定每孔的吸光度（OD 值）。读取 OD 值前，确保酶标仪已预热并校准，仪器参数设置正确。读取过程中，确保微孔板放置平整，避免因倾斜导致读数不准确。读取完成后，记录每孔的 OD 值，用于后续结果计算。

结果计算：以标准品浓度为横坐标，对应的 OD 值为纵坐标，使用专业的数据分析软件（如 GraphPad Prism、Origin 等）绘制标准曲线。通过软件拟合出标准曲线的回归方程。然后，根据样本的 OD 值，代入回归方程中，计算出样本中羟基丁酸 - 3 的浓度。若样本在检测前进行了稀释，需将计算得到的浓度乘以相应的稀释倍数，得到样本中实际的羟基丁酸 - 3 含量。同时，可计算出检测结果的变异系数（CV 值），评估检测结果的重复性和可靠性。

七、注意事项

本试剂盒仅用于科研实验，严禁用于临床诊断、或其他非科研用途。使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，熟悉操作步骤和注意事项。

实验过程中，应严格遵守实验室安全操作规程，穿戴好防护服、手套、护目镜等防护用品。试剂盒中的某些试剂可能具有毒性或腐蚀性，如酶标试剂、终止液等，操作时需特别小心，避免接触皮肤、眼睛和口腔。若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。

试剂盒从冰箱取出后，需在室温下充分平衡后再使用，避免因温度差异导致实验误差。不同批次的试剂盒可能存在一定差异，请勿混用不同批次的试剂盒组分，以免影响检测结果的准确性和重复性。

加样过程是实验的关键步骤之一，加样量的准确性和一致性直接影响检测结果。使用移液器时，需定期校准，确保移液体积准确无误。加样过程中，要避免产生气泡，若有气泡，应轻轻弹击微孔板使气泡逸出，以免影响反应结果。

洗涤过程对降低背景干扰、提高检测特异性至关重要。无论是使用洗板机还是手动洗涤，都要确保洗涤充分，每孔液体被完全去除。洗涤液应现用现配，避免使用过期或受污染的洗涤液。

显色剂对光敏感，使用和保存时应避光。显色反应时间应严格控制，按照说明书要求进行操作，避免过长或过短的显色时间对结果造成影响。在显色过程中，尽量减少环境光线的干扰，可将微孔板放置在不透光的盒子或罩子中进行孵育。

实验结束后，试剂盒中的剩余试剂应按照规定的储存温度妥善保存，直至有效期。废弃的试剂盒及实验废弃物应按照实验室废弃物处理规定进行处理，避免对环境造成污染。同时，对实验数据应进行妥善记录和保存，以便后续分析和查阅。

仪器设备

· 定期校准：酶标仪、移液器等仪器设备需要定期进行校准和维护，确保其准确性和稳定性。可以按照仪器制造商的建议，定期将仪器送专业机构进行校准。

· 日常检查：在每次使用前，对仪器设备进行检查，确保其正常运行。例如，检查酶标仪的波长准确性、吸光度线性等；检查移液器的吸液和排液功能是否正常。

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