牛干扰素诱导T细胞α亚族趋化因子 (I-TAC)ELISA试剂盒

说明书：

需自备物品：

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

牛干扰素诱导T细胞α亚族趋化因子 (I-TAC)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

选择一款合适的酶标板，是ELISA实验成功的 步，然而很多人却忽略了这一点。大家在做实验时往往只考虑实验本身，却不知道产品往往对实验也有很大影响。合适的选择产品，将有助于实验的成功进行。我们在进行ELISA实验的时候通常考虑以下这些因素：

一：孔底的形状：
现在的厂家均将酶标孔设计成独立的柱状，适当地增大孔与孔之间的距离，使之能独立分开，从而 程度地减少交叉污染。不同种类的酶标板其孔底的形状是不同的。以下是一些常见孔底形状：
平底：底部水平，也叫F底。光透过底部不会发生偏折，可以 程度的透光。应用于因可视性或其他原理需要用到圆底的实验。
圆底：也叫U底，提供 的清洗效果以及混合型能，适合需要测试沉淀物的应用。
C型底：介于平底和圆底之间能够提供好的清洗效果，同时结合了平底的优点。
锥型底：又称V底，适用于精准取样以及储存微量样本，以获得 小容量的回收。
二：酶标板的颜色：
酶标板的颜色有三种：透明、黑色、白色。
绝大多数ELISA都选择透明板作为实验材料。白色和黑色的酶标板一般用于发光检测。黑色的酶标板自身会有光吸收，所以其信号要弱于白色的酶标板。黑色的酶标板一般用于检测较强的光，如荧光检测；相反，白色的酶标板可用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光和底物显色（如双荧光素酶报告基因分析）。
三：酶标板的材质：
常见的材质有聚乙烯（polyethylene,PE），聚丙烯 （polypropylene,PP），聚苯乙烯（Polystyrene,PS），聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯（Polycarbonate,PC）。ELSIA中应用最广的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯质软板薄，可剪割，价格低廉。缺点是光洁度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相应的背景值也会有所增加。通常要在酶标板表面进行离子接枝处理，在聚合物表面引入醛基、氨基、环氧基等活性官能团，提高基体表面的性能。
四：不同的结合机理：
包被物质与板底表面的有效结合是ELISA中至关重要的一步。因此，在实验开始前应仔细分析待包被物质的结构特点与化学特性，以选择适当的酶标板。一般来说，包被物质与板底有以下几种结合方式：被动吸附、共价结合和亲和捕获。
被动吸附（Passive Adsorption）：被动吸附的机理比较复杂，包被物质与板底之间的结合主要依靠分子间作用力（范德华力）和氢键。在绝大多数ELISA中，包被物质与板底的结合都是依靠被动吸附来完成的。一般来说，中等分子量及大分子量的抗原（或抗体）与板底之间的结合是依靠被动吸附来完成的。在挑选酶标板时通常要考虑板底表面的疏水性/亲水性特征。下表中列出了不同亲水性的板底表面的适用范围及用途：