大鼠闭合蛋白(OCLN)ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-D9619

产品规格：48/96T

大鼠 F - 肌动蛋白 ELISA 检测试剂盒是用于科研中定量检测大鼠样本中 F - 肌动蛋白水平的工具，以下是相关介绍：
检测原理：采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验。在预包被抗大鼠 F - 肌动蛋白抗体的微孔酶标板中，加入大鼠 F - 肌动蛋白校准品和待测样本，再加入 HRP 标记的抗大鼠 F - 肌动蛋白抗体，经过温育与充分洗涤，在微孔板固相表面形成 “固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体” 的夹心复合物。加底物显色后，用酶标仪在 450nm 波长上测定吸光度，其与样品中 F - 肌动蛋白的浓度正相关，进而计算出样本浓度。
试剂盒组成：通常包括包被有抗 F - 肌动蛋白抗体的酶标板、F - 肌动蛋白标准品、样品稀释液、HRP 标记的抗 F - 肌动蛋白抗体、底物溶液、洗涤液、终止液等。
性能特点：特异性方面，试剂盒中的抗体能特异地识别 F - 肌动蛋白，与其他细胞内蛋白等一般无明显交叉反应。重复性上，通常板内变异系数一般小于 10%，板间变异系数小于 15%。
保存条件与有效期：一般在 2 - 8℃避光保存，未开封的试剂盒有效期通常为 6 个月。

双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术，核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。

一、核心原理
包被：将针对目标抗原的捕获抗体（ 抗体）固相化到酶标板微孔内壁，形成固相抗体。
结合抗原：加入待测样本或标准品，样本中的目标抗原与固相捕获抗体特异性结合，形成 “固相抗体 - 抗原” 复合物，洗涤去除未结合的杂蛋白。
结合检测抗体：加入酶标记的检测抗体（ 抗体，与捕获抗体识别抗原的不同表位），检测抗体与抗原另一端结合，形成 “固相抗体 - 抗原 - 酶标检测抗体” 的夹心复合物，再次洗涤去除游离检测抗体。

显色与定量：加入酶底物（如 TMB、OPD），酶（常用 HRP、AP）催化底物显色，显色强度与样本中抗原浓度正相关。加入终止液终止反应后，用酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本中抗原的具体浓度。

二、关键特点
特异性高：两种抗体均针对目标抗原，且识别不同表位，交叉反应风险低，能有效排除杂蛋白干扰。
灵敏度强：夹心结构可放大信号，酶催化反应进一步增强检测信号，能检出低至 pg/mL 或 ng/mL 级别的抗原。
适用范围广：仅适用于具有两个及以上抗原表位的大分子抗原（如蛋白质、多肽、病毒颗粒等），无法检测小分子抗原（无足够表位结合两种抗体）。
定量准确：标准曲线线性关系良好，可通过梯度浓度标准品精准推算样本中抗原浓度，重复性佳（板内 / 板间 CV 通常＜10%-15%）。

三、核心操作流程
包被：用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液 pH9.6）稀释捕获抗体，加入酶标板，4℃孵育 12-16 小时或 37℃孵育 2 小时，洗涤 3-5 次。
封闭：加入封闭液（如 5% 脱脂奶粉、BSA），37℃孵育 1-2 小时，封闭未结合抗体的空白位点，洗涤去除多余封闭液。
加样反应：加入梯度浓度标准品和待测样本，37℃孵育 1-2 小时，让抗原与捕获抗体充分结合，洗涤去除未结合抗原。
加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，37℃孵育 1 小时，洗涤去除游离检测抗体。
显色：加入底物溶液，37℃避光孵育 10-30 分钟（根据试剂盒要求调整），观察显色情况。
终止与检测：加入终止液（如硫酸溶液），15 分钟内用酶标仪在对应波长（如 TMB 底物检测波长 450nm）读取吸光度。
结果计算：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，代入样本吸光度值计算抗原浓度。

四、关键注意事项
抗体选择：捕获抗体与检测抗体需配对使用，确保识别抗原的不同表位，避免交叉竞争影响结合。
洗涤步骤：每步反应后需充分洗涤（用 PBST 缓冲液），避免未结合物质残留导致背景偏高或假阳性。
反应条件控制：严格控制孵育温度、时间，底物显色需避光，终止后及时检测，避免显色过度或褪色。
试剂质量：抗体、酶标记物、底物需在有效期内储存使用，避免因试剂失效影响检测结果。

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