牛上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)ELISA试剂盒 

如何正确的选择ELISA 试剂盒

ELISA试剂盒是一种常用的生物实验工具，用于检测样品中的特定蛋白质或抗体。在选择ELISA试剂盒时，需要考虑多个因素，以确保实验的准确性和可靠性。以下是选择ELISA试剂盒时需要考虑的几个要点。

牛上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78)ELISA试剂盒 

操作步骤

       1)将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体。洗涤除去尚未结

  合的抗体及一些杂质。

  2)加入待测标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

  3)加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。 洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

  4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标所使用的抗体 分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。

  在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被为钩状效应(hook effect)，因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)时，应注意可测范围的 值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。

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