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实验原理

1. 抗原抗体反应
ELISA试剂盒中的抗原或抗体被固定在固相载体上，当加入待测样本时，样本中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生反应，形成抗原抗体复合物。
2. 酶标记物的结合
将酶标记物与特异性抗体或抗原结合，形成酶标记抗体或抗原。酶标记物在反应中起到催化作用，加速反应进程，提高检测灵敏度。

3. 酶促反应
在酶标记物与抗原抗体复合物结合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下发生氧化还原反应，产生颜色变化。颜色深浅与待测样本中的抗原或抗体浓度成正比。

4. 吸光度检测
将反应体系中的吸光度进行测量，通过比较标准品溶液与待测样本溶液的吸光度值，即可计算出待测样本中的抗原或抗体浓度。

实验所需自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作步骤

1)涂层:微孔板的孔涂上捕获抗体或抗原。

2)封闭:孔内加入封闭剂(如牛血清白蛋白或羧甲基纤维素)，阻止非特异性蛋白质结合。

3)样本添加:加入含有未知浓度的目标抗原或抗体的样本。

4)洗涤:去除未结合的物质。

5)检测抗体添加:加入对特定抗原有特异性的酶标记检测抗体。

6) 再次洗涤:再次去除未结合的检测抗体。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物产生颜色变化。

8)终止反应:加入终止溶液停止酶的反应(在某些类型的ELISA中需要)。

9)读数:使用光谱光度计测定每个孔的吸光度(通常是在特定波长下)，吸光度与样本中抗原或抗体的浓度成正比。