显色是ELISA实验中的重要步骤，其目的是通过酶促反应将无色的底物转化为有色的产物，从而实现对目标分子的定量或定性检测。在显色过程中，酶的催化作用将无色的底物转化为有色的产物，这可以通过肉眼观察或使用仪器进行检测。

在显色过程中，需要注意以下几点：

1. 温度控制：显色反应需要在一定的温度下进行，通常在室温下进行，也可以根据需要进行加热。温度对酶促反应的影响很大，过高或过低的温度都会影响反应效果。
2. 底物浓度：底物浓度的选择对显色反应的效果也有很大影响。如果底物浓度过高，会导致反应过快，难以控制；如果底物浓度过低，则反应速度会变慢，影响实验的准确性。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 酶的活性：酶的活性对显色反应的效果至关重要。如果酶的活性不足，会导致反应速度变慢，影响实验的准确性；如果酶的活性过高，则会导致反应过快，难以控制。因此，在实验前需要对酶的活性进行检测和调整。
4. 终止液的选择：在显色反应结束后，需要加入终止液来停止反应。终止液的选择对实验结果也有很大影响。如果选择不合适的终止液，会导致实验结果不准确或出现偏差。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。

二、终止

终止是ELISA实验中的另一个重要步骤，其目的是停止显色反应，使实验结果得以稳定和固定。在终止过程中，需要注意以下几点：

1. 终止剂的选择：终止剂的选择对实验结果有很大影响。不同的终止剂会对显色反应产生不同的影响，因此需要根据实验的具体情况进行选择。常用的终止剂有硫酸、盐酸、氢氧化钠等。
2. 终止剂的浓度：终止剂的浓度也会影响实验结果。如果浓度过高，可能会导致实验结果偏低；如果浓度过低，则可能会导致实验结果偏高。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 终止时间：终止时间的选择也会影响实验结果。如果过早加入终止剂，可能会导致反应未完全停止，影响实验的准确性；如果过晚加入终止剂，则可能会导致实验结果不稳定或出现偏差。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。

总的来说，显色和终止是ELISA实验操作中的重要步骤，需要仔细操作和掌握。通过控制实验条件和选择合适的试剂，可以获得准确的实验结果，为生物学和提供可靠的数据支持。

双夹心ELISA
此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：
① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。
竞争ELISA
此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
④ 用ELISA检测仪测定OD值。
被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。