兔免疫球蛋白G Fc段低亲和力受体IIIb(FcγR3B)ELISA试剂盒

定性和定量是ELISA测定按其表示测定结果的方式分为的两大类。定性测定是对标本中是否存在待测抗原或抗体作出结论，分别用“阳性"和“阴性"来表示。由此可见病原体的抗原或抗体通常是用的定性测定，以此判断特定病原体感染的存在与否。

定量测定基本上是用于非病原体抗原物质的测定，是对标本中待测抗原的数量进行量值测定，以具体数值来表示。定量测定，如激素、细胞因子、标志物、小分子药物等FP，hCG、细胞因子等的定量测定。

ELISA定性测定的“阴性"和“阳性"的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值(cut-off)。elisa试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线(又称标准曲线)是定量测定的量值依据。

兔免疫球蛋白G Fc段低亲和力受体IIIb(FcγR3B)ELISA试剂盒

ELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写也可以帮助您看明白ELISA实验结果：

(1)S／CO：其中S为sample(样本)或specimen(标本)的简写，表示的是标本测定的吸光度值，CO为cut-off值的简写。除竞争抑制法外，其他ELISA定性测定模式中，当S／CO值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性。

(2)S／N或P／N：其中S同(1)，N为negative(阴性对照)的简写，P为patient(患者)的简写。较早的试剂盒很多都使用S／N或P／N≥2．1为阳性判定标准。

标曲显色过强无明显梯度

1、主要怀疑点：洗板不充分：

1.1、机器洗版：确保机器设置的针头能吸干孔中液体，并且加液针头能加液大于350ul，加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。

1.2、手动洗板，严格按照步骤，使用干净灭菌的枪头和加样槽，使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液，静置90秒，在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。

1.3、特别注意，在加入TMB前的洗板步骤极其重要，残留的HRP酶会直接导致TMB显色。

2、次要怀疑点：

2.1、TMB 已经污染，检测TMB是否透明无色，如果偏蓝就是污染了。

2.2、检查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是双蒸水，三蒸水或无离子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属，以及HClO都会氧化TMB。

2.3、酶标板受潮，长霉，或者试剂过期。

2.4、环境污染，空气中有导致显色的物质或者粉尘。

复孔做的不好，CV值差异大

可能原因分析：

1、复孔OD450数值在0.5-2.5之间计算的偏差相对较小，小于0.5会由于操作误差导致计算的CV值偏高，复孔样品数量在5-10个 。

2、操作时按照标准动作进行加样，比如要求枪头不能碰触到孔壁内侧和底面，枪头尖部的残留液体可以触碰到液面，使之流入样品孔。

3、加样尽量快速准确，不要产生气泡。

4、样品需要做预实验，使用不同浓度进行测试，找到 稀释比。错误的稀释比会导致复孔误差大

Top4：显色太快，背景小于0.2，但是样品没有阳性。试剂盒工作正常，但是样品没有阳性。

可能原因分析：

1、样品是否保存妥当。蛋白容易降解， 保存在-80℃，或者新鲜样品立即检测。

2、样品含有的基质影响抗原抗体结合，导致没有阳性。需要适当稀释样品 1/5，1/10，1/100，1/1000来摸索 检测稀释比，稀释液稀释样品后会消弱基质效应，阳性就会升高。

3、部分试剂盒要求4度过夜孵育样品和标准品，如果样品稀释后还是检测不到阳性，建议4度16小时孵育标准品和样品，其它步骤在按照说明书提供的温度和时间进行操作。

4、如果是特殊的样品，请通过邮件与我们技术支持进行联系。