猴过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARγC1α)ELISA试剂盒

在细胞生物学研究中扮演着至关重要的角色，特别是在细胞有丝分裂和染色体分离的过程中。近年来，随着对CENPH功能的深入研究，科学家们越来越需要一种高效、准确且可靠的实验工具来检测和分析这一蛋白的表达和活性。为此，应运而生，为相关研究领域提供了强大的技术支持。

一、测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
⑴ 酶与抗体的活性 常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。
⑵ 结合物的定量测定 一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=OD403×0.42
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62
已知酶量和IgG量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4
结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果 。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时 。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时 。


二、组成与操作流程

一个完整的CENPH ELISA Kit通常包括以下几个部分：酶标板、标准品、抗体、酶标试剂、显色剂、终止液以及必要的实验耗材。在使用时，首先需要将标准品和待测样本加入酶标板中，然后依次加入特定的抗体和酶标试剂，进行孵育和洗涤等操作， 加入显色剂进行显色反应，并通过酶标仪读取结果。整个操作流程简便快捷，且具有较高的可重复性和准确性。

三、应用领域

试剂盒在多个领域具有广泛的应用前景。首先，在细胞生物学研究中，科学家们可以利用该试剂盒检测不同细胞系或不同处理条件下CENPH蛋白的表达水平，进而揭示其在细胞周期调控和染色体分离等方面的作用机制。其次，在临床医学领域，该试剂盒可以诊断和预后评估等方面。

四、ELISA的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的， -71℃冻存备用。标本
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

90分钟一步法ELISA试剂盒：
1.高效，灵敏，特异的抗体
2.稳定的重复性和可靠性
3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高和固相载体
4.适用血清，血浆，组织匀浆液，细胞培养上清液，尿液等多种标本型