鸡乳酸脱氢酶B(LDHB)酶联免疫试剂盒

ELISA 实验步骤：

1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。

2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。

3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。

4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。

5.显色：TMB显色

A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.

B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。

终止液：2N硫酸

A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。

6.450nm 波长测OD值

阻断ELISA
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪TGE）、猪伪（PR）及猪胸膜（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。
本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。