鸡激肽释放酶7(KLK7)ELISA试剂盒

ELISA 实验步骤：

1.包被抗原：稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液，多肽浓度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC过夜，洗净。

2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭，0.1ml/孔，37oC1h，洗净。

3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔，37oC 30分钟，洗净。

4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔，37oC 40分钟，洗净。

5.显色：TMB显色

A液：四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.

B液：5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。

终止液：2N硫酸

A液、B液各一滴，比光显色10分钟，终止液一滴。

6.450nm 波长测OD值

注意事项

1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

3. 一次加样时间 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线， 做复孔。

5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请 乘以稀释倍数。

6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

7. 底物请避光保存。

8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

   问：做出来的结果：标准品的吸光度呈线性回归，但是样品的吸光度都和本体吸光度值接近，正常未予干预的大鼠血浆都基本没有5-HT         表达，这是什么原因？（大鼠5羟色胺（5-HT）Elisa试剂盒

  答：原因是：样本、稀释、室控和机器操作等，原因都可能造成吸光度都和本体吸光度值接近，