人激肽释放酶8(KLK8)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-5863

产品规格：【48T/96T】

检测原理：

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的生物化学分析技术，广泛应用于检测蛋白质、抗体、激素、药物等生物分子。其检测原理主要基于以下几个关键步骤：

1. 抗原-抗体特异性结合ELISA的核心是利用抗原与抗体之间的特异性结合。抗原和抗体之间通过互补的结构相互识别并结合，这种结合具有高度的特异性和亲和力。例如，如果要检测某种特定的蛋白质（抗原），就需要使用针对该抗原的特异性抗体。

2. 固相化技术ELISA实验中，抗原或抗体通常被固定在固相载体上（如塑料微孔板）。这种固相化过程使得抗原或抗体能够稳定地吸附在微孔板表面，便于后续的反应和检测。固相化的抗原或抗体被称为“捕获相”，而加入的样本中的抗原或抗体则被称为“检测相”。

3. 酶标记技术为了实现检测信号的放大和可视化，ELISA中通常使用酶标记的抗体或抗原。常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。酶标记的抗体或抗原与固相化的抗原或抗体结合后，酶会与底物反应，产生可检测的信号（如颜色变化或荧光信号）。

4. 底物反应与信号检测酶与底物反应后，会产生颜色变化或荧光信号。这种信号的强度与样本中目标分子的浓度成正比。例如，辣根过氧化物酶（HRP）可以催化过氧化氢分解，使无色的底物（如TMB）变为蓝色，加入酸终止反应后变为黄色，通过分光光度计测量吸光度即可定量分析目标分子的浓度。

5. 检测模式ELISA主要有以下几种检测模式：

1. 检测目标：明确要检测的物质是什么，例如是检测某种特定的蛋白质、抗体、激素还是细胞因子等。不同的目标物质需要选择相应的特异性试剂盒。如检测人白细胞介素 - 6（IL-6），就需要选择专门针对人 IL-6 的 ELISA 试剂盒。
2. 样本类型：确定样本来源和类型，常见的样本有血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等。不同的试剂盒可能对样本类型有要求，有些试剂盒可能只适用于血清或血浆样本，而对于细胞培养上清或组织匀浆样本的检测效果可能不佳。例如，检测血液中的某种标志物，就需要选择适用于血清或血浆检测的试剂盒。
3. 检测范围：查看试剂盒的检测范围是否符合实验需求。每个试剂盒都有其特定的检测区间，样品中目标物质的浓度应在试剂盒的检测范围内才能获得准确可靠的结果。如果样品中目标物质浓度过高，可能需要进行稀释；如果浓度过低，可能超出试剂盒的检测下限而无法准确检测。例如，某试剂盒的检测范围是 10 - 500 pg/mL，若样品中目标物质浓度为 1000 pg/mL，则需稀释后再检测。
4. 灵敏度和特异性：灵敏度高的试剂盒能够检测到低浓度的目标物质，而特异性好则可以减少非特异性反应，确保检测结果的准确性。可以参考试剂盒的说明书或相关文献，了解其灵敏度和特异性指标，也可以咨询其他使用过该试剂盒的用户。例如，灵敏度为 1 pg/mL 的试剂盒比灵敏度为 10 pg/mL 的试剂盒能检测到更低浓度的目标物。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

Calculation of results

1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.

2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.

3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.

4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.

5. The sensitivity by this assay is 10 pg/ml

6. Standard curve

Storage： 2-8℃.

validity： six months.

FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!

生产厂家：上海笃玛生物科技有限公司