人甲胺喋呤(MTX)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-5866

产品规格：【48T/96T】

检测原理：

酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的生物化学分析技术，广泛应用于检测蛋白质、抗体、激素、药物等生物分子。其检测原理主要基于以下几个关键步骤：

1. 抗原-抗体特异性结合ELISA的核心是利用抗原与抗体之间的特异性结合。抗原和抗体之间通过互补的结构相互识别并结合，这种结合具有高度的特异性和亲和力。例如，如果要检测某种特定的蛋白质（抗原），就需要使用针对该抗原的特异性抗体。

2. 固相化技术ELISA实验中，抗原或抗体通常被固定在固相载体上（如塑料微孔板）。这种固相化过程使得抗原或抗体能够稳定地吸附在微孔板表面，便于后续的反应和检测。固相化的抗原或抗体被称为“捕获相”，而加入的样本中的抗原或抗体则被称为“检测相”。

3. 酶标记技术为了实现检测信号的放大和可视化，ELISA中通常使用酶标记的抗体或抗原。常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。酶标记的抗体或抗原与固相化的抗原或抗体结合后，酶会与底物反应，产生可检测的信号（如颜色变化或荧光信号）。

4. 底物反应与信号检测酶与底物反应后，会产生颜色变化或荧光信号。这种信号的强度与样本中目标分子的浓度成正比。例如，辣根过氧化物酶（HRP）可以催化过氧化氢分解，使无色的底物（如TMB）变为蓝色，加入酸终止反应后变为黄色，通过分光光度计测量吸光度即可定量分析目标分子的浓度。

5. 检测模式ELISA主要有以下几种检测模式：

直接ELISA：抗原固定在固相载体上，加入酶标记的抗体与抗原结合， 通过底物反应检测信号。

间接ELISA：抗原固定在固相载体上，先加入未标记的特异性抗体，再加入酶标记的二抗（针对一抗的抗体）， 通过底物反应检测信号。

夹心ELISA：固相载体上固定捕获抗体，加入样本中的抗原，再加入酶标记的检测抗体， 通过底物反应检测信号。夹心ELISA是检测蛋白质等大分子最常用的方法。竞争ELISA：样本中的抗原与固相载体上的抗原竞争结合酶标记的抗体，通过检测酶标记抗体的结合量来推断样本中抗原的浓度。

6. 定量分析ELISA的检测结果可以通过标准曲线进行定量分析。标准曲线是通过一系列已知浓度的标准品进行检测，绘制吸光度（或荧光强度）与浓度的关系曲线。根据样本的吸光度或荧光强度，通过标准曲线可以计算出样本中目标分子的浓度。

标本的稀释原则

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

Calculation of results

1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.

2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software.

3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.

4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.

5. The sensitivity by this assay is 10 pg/ml

6. Standard curve

Storage： 2-8℃.

validity： six months.

FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!

生产厂家：上海笃玛生物科技有限公司