人免疫球蛋白 A2(IgA2)酶联免疫试剂盒是一种用于检测人血清或其他生物样本中 IgA2 含量的工具。以下将对其进行详细介绍。
试剂盒的组成
- 抗体:通常包含针对 IgA2 的特异性抗体,用于结合样本中的 IgA2。这些抗体经过精心筛选和制备,以确保其特异性和灵敏度。
- 酶标板:用于吸附抗体和样本,通常为 96 孔或其他规格的板。
- 酶标记物:一般为辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)等酶标记的抗体或抗原,用于与结合在酶标板上的 IgA2 发生反应。
- 底物:与酶标记物发生反应,产生可检测的信号,如颜色变化或荧光强度。
- 标准品:已知浓度的 IgA2 标准溶液,用于制作标准曲线,以便确定样本中 IgA2 的含量。
- 缓冲液:用于稀释样本、洗涤酶标板等操作,以确保实验的准确性和稳定性。
检测原理
人免疫球蛋白 A2 酶联免疫试剂盒采用双抗体夹心法或竞争法等检测原理。
- 双抗体夹心法:首先将针对 IgA2 的捕获抗体固定在酶标板上,然后加入样本,样本中的 IgA2 与捕获抗体结合。接着加入酶标记的检测抗体,该抗体与结合在酶标板上的 IgA2 结合。 加入底物,酶催化底物反应产生可检测的信号。信号强度与样本中 IgA2 的含量成正比,通过与标准曲线比较,可以确定样本中 IgA2 的浓度。
- 竞争法:将一定量的酶标记的 IgA2 抗原和样本中的 IgA2 竞争结合固定在酶标板上的抗体。加入底物后,酶催化底物反应产生信号。样本中 IgA2 的含量越高,与抗体结合的竞争就越激烈,酶标记的 IgA2 结合的机会就越少,信号强度就越低。通过与标准曲线比较,可以确定样本中 IgA2 的浓度。
上海笃玛生物科技有限公司的 ELISA 试剂盒具有以下特点:
- 种类丰富:涵盖多种种属和指标的检测,如犬免疫球蛋白 E、鸡晶体蛋白、人激活素 B 等,还包括大鼠的多种指标检测试剂盒,能满足不同科研需求。
- 性能优良
- 准确性高:标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值大于等于 0.9900。
- 灵敏度高:如犬免疫球蛋白 E 的 ELISA 试剂盒检测浓度小于 1.0pg/mL,鸡晶体蛋白的 ELISA 试剂盒检测浓度小于 10pg/mL。
- 特异性强:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性好:板内、板间变异系数均小于 15%。
- 组成齐全:以犬免疫球蛋白 E (IgE) ELISA 试剂盒为例,包含微孔酶标板、标准品、样本稀释液、检测抗体 - HRP、20× 洗涤缓冲液、底物 A、底物 B、终止液、封板膜、说明书、自封袋等。
- 适用样本类型多样:适用于血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。
- 保存条件及有效期明确:通常保存在 2-8℃,避光防潮保存,有效期一般为 6 个月。
上海笃玛生物科技有限公司的 ELISA 试剂盒检测时间因具体试剂盒和操作步骤而异。以人可溶性髓系细胞触发受体 -1(sTREM -1)ELISA 试剂盒为例,其检测时间约为 2.5 小时,具体步骤及时间如下:
- 温育:从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL,待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL,随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体 50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
- 洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板),此过程约 10 分钟。
- 显色:所有孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
- 终止及检测:所有孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
此外,该公司的小鼠肺表面活性物质相关蛋白 C ELISA 试剂盒的检测时间为 2 小时3。还有部分试剂盒采用原装进口,一步孵育、一步洗板,操作时间仅需 90 分钟。
使用方法
- 样本准备:根据试剂盒的要求,采集合适的生物样本,如血清、血浆、尿液等。样本可以进行适当的处理,如离心、稀释等。
- 试剂盒准备:将试剂盒从冰箱中取出,平衡至室温。按照说明书的要求,准备所需的试剂和材料。
- 加样:将标准品和样本加入到酶标板中,注意避免产生气泡。
- 孵育:将酶标板放入孵育箱中,按照说明书的要求进行孵育,使抗体与样本中的 IgA2 充分结合。
- 洗涤:用洗涤液洗涤酶标板,去除未结合的物质。
- 加酶标记物:加入酶标记的抗体或抗原,继续孵育,使酶标记物与结合在酶标板上的 IgA2 结合。
- 再次洗涤:再次用洗涤液洗涤酶标板,去除未结合的酶标记物。
- 加底物:加入底物,使酶催化底物反应产生可检测的信号。
- 终止反应:根据说明书的要求,加入终止液终止反应。
- 检测:使用酶标仪等设备检测信号强度,根据标准曲线计算样本中 IgA2 的含量。
注意事项
- 严格按照说明书的要求进行操作,避免因操作不当导致结果不准确。
- 样本的采集、处理和保存应符合要求,避免样本污染或变质。
- 试剂盒应在规定的条件下保存,避免过期或失效。
- 使用前应检查试剂盒的完整性,如有破损或缺失应及时更换。
- 实验过程中应避免交叉污染,使用不同的移液器和吸头处理不同的样本和试剂。
- 检测结果应结合其他检查结果进行综合分析,不能仅凭单一指标做出诊断。
总之,人免疫球蛋白 A2 酶联免疫试剂盒是一种重要的检测工具,在临床诊断、科研研究和药物研发等领域具有广泛的应用前景。在使用过程中,应严格按照说明书的要求进行操作,确保检测结果的准确性和可靠性。