人肌肉肌酸激酶(CKM)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-5832

优点

• 高灵敏度：能够检测到样品中极低浓度的目标物质，通常可以达到 pg/mL 或 ng/mL 级别。
• 高特异性：基于抗原 - 抗体的特异性结合，能够准确识别目标物质，减少其他物质的干扰。
• 操作简便：试剂盒提供了成套的试剂和标准化的操作流程，无需复杂的仪器设备和专业技能，易于在实验室和临床检测中推广应用。
• 可同时检测多个样品：微孔板的设计使得可以同时对大量样品进行检测，提高了检测效率，适用于大规模的筛查和研究。

局限性

• 需要特异性抗体：试剂盒的特异性取决于所使用的抗体，如果抗体的特异性不好，可能会出现假阳性或假阴性结果。
• 检测范围有限：每个试剂盒都有其特定的检测范围，样品中目标物质的浓度过高或过低都可能影响检测结果的准确性。
• 存在交叉反应：某些情况下，可能会与结构相似的其他物质发生交叉反应，导致结果不准确。
• 结果受多种因素影响：实验操作过程中的温度、时间、洗涤次数等因素都可能对检测结果产生影响，需要严格按照操作规程进行实验，以确保结果的可靠性。

以下是关于人肌肉肌酸激酶(CKM)酶联免疫试剂盒的相关介绍：

基本信息

• 英文名称：Human CKM (Creatine Kinase, Muscle) ELISA Kit 。
• 常用规格：48T/96T。
• 适用范围：主要用于科研实验，禁用于临床诊断。

1. 检测目标：明确要检测的物质是什么，例如是检测某种特定的蛋白质、抗体、激素还是细胞因子等。不同的目标物质需要选择相应的特异性试剂盒。如检测人白细胞介素 - 6（IL-6），就需要选择专门针对人 IL-6 的 ELISA 试剂盒。
2. 样本类型：确定样本来源和类型，常见的样本有血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等。不同的试剂盒可能对样本类型有要求，有些试剂盒可能只适用于血清或血浆样本，而对于细胞培养上清或组织匀浆样本的检测效果可能不佳。例如，检测血液中的某种标志物，就需要选择适用于血清或血浆检测的试剂盒。
3. 检测范围：查看试剂盒的检测范围是否符合实验需求。每个试剂盒都有其特定的检测区间，样品中目标物质的浓度应在试剂盒的检测范围内才能获得准确可靠的结果。如果样品中目标物质浓度过高，可能需要进行稀释；如果浓度过低，可能超出试剂盒的检测下限而无法准确检测。例如，某试剂盒的检测范围是 10 - 500 pg/mL，若样品中目标物质浓度为 1000 pg/mL，则需稀释后再检测。
4. 灵敏度和特异性：灵敏度高的试剂盒能够检测到低浓度的目标物质，而特异性好则可以减少非特异性反应，确保检测结果的准确性。可以参考试剂盒的说明书或相关文献，了解其灵敏度和特异性指标，也可以咨询其他使用过该试剂盒的用户。例如，灵敏度为 1 pg/mL 的试剂盒比灵敏度为 10 pg/mL 的试剂盒能检测到更低浓度的目标物。

检测原理

• 双抗体夹心法：将特异性抗人 MAT 抗体预包被在酶标板上，加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，样本中存在的 MAT 与固相抗体和检测抗体结合，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，再加入显色底物 TMB，颜色反应的深浅与样本中 MAT 的浓度成正比。
• 竞争法：将已知抗原包被在酶标板上，加入待测样本和酶标记的抗原，样本中的抗体与酶标记抗原竞争结合包被抗原，洗涤后加入底物显色，颜色深浅与样本中抗体含量成反比。
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试剂盒组成

• 固相载体：已包被抗原或抗体的 96 孔聚苯乙烯酶标板。
• 酶标记物：酶标记的抗原或抗体。
• 底物：如 TMB，在酶的作用下发生显色反应。
• 对照品：阴性对照品和阳性对照品用于定性测定，参考标准品用于定量测定。
• 稀释液：用于稀释结合物及标本。
• 洗涤液：常用含 0.05% 吐温 20 磷酸缓冲盐水。
• 终止液：如硫酸，用于终止酶反应。

标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法
1、拟和曲线：
输入 行： 浓度值， 如0 10 50 100 400
输入 行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。
单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。
2、计算浓度：
次实验：
标准曲线为：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
为例，已知OD值，计算浓度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0

样本类型

包括血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆液等液体样本。

操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度： 检测浓度小于10 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6个月

品牌与价格

• 上海笃玛生物科技有限公司：特异性强、灵敏度高、稳定性好、免费代测，价格需询价。