人肌球蛋白轻链激酶(MLCK/MYLK)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-5828

ELISA试剂盒优势：

1、抗体----高效、灵敏、特异性好

2、规范包被操作----吸附均匀、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

3、优化方案----重复性高，可靠性强

4、高标准技术服务要求：灵敏度高，特异性强

5、适用范围广：血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本

以下是关于人肌球蛋白轻链激酶(MLCK/MYLK)酶联免疫试剂盒 的相关介绍：

人肌球蛋白轻链激酶 (MLCK/MYLK) 酶联免疫试剂盒

肌球蛋白轻链激酶（MLCK/MYLK）作为丝氨酸 / 苏氨酸特异性蛋白激酶家族的重要成员，在调节 II 型肌球蛋白轻链磷酸化进程中扮演关键角色，对肌肉收缩及诸多细胞活动影响深远。人肌球蛋白轻链激酶酶联免疫试剂盒专为精准定量检测人样本中的 MLCK/MYLK 量身打造，广泛应用于科研与临床前期探索场景。

检测原理

该试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）运作。试剂盒内的微孔板已提前包被高度特异性的抗人 MLCK/MYLK 抗体。当加入样本，如血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆时，样本中的 MLCK/MYLK 抗原迅速与包被在微孔板上的抗体特异性结合。随后，加入生物素标记的另一种抗 MLCK/MYLK 抗体，其会与已结合在固相抗体上的 MLCK/MYLK 抗原进一步结合，形成稳固的 “固相抗体 - MLCK/MYLK - 生物素化抗体” 夹心结构。紧接着，引入亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）结合物，由于生物素与亲和素之间存在高度特异性结合能力，HRP 顺利连接到免疫复合物上。加入显色底物四甲基联苯胺（TMB）后，在 HRP 的高效催化下，TMB 发生显色反应，反应生成的颜色深浅与样本中 MLCK/MYLK 的含量呈严格正相关。 加入终止液终止反应，借助酶标仪在 450nm 特定波长下 检测吸光度（OD 值），再依据预先绘制的标准曲线，即可精准计算出样本中 MLCK/MYLK 的浓度 。

样本类型及处理

1. 血清：务必使用无热原、无内毒素的采采集血液，采集后让血液在室温下自然静置凝固 10 - 20 分钟，随后以 1000×g 的离心力高速离心 15 分钟，小心、缓慢地吸取上层血清。操作过程中必须避免使用溶血或脂血样本，因为溶血会致使细胞内成分释放，严重干扰检测反应，而脂血则可能阻碍试剂与样本的正常结合反应 。

1. 血浆：可选用 EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂。采血完成后，应立即以 1000×g 的转速离心 15 分钟，获取纯净的血浆。同样需要严格避开溶血或脂血样本，以保障检测结果的可靠性 。

1. 细胞培养上清：针对细胞培养样本，收集细胞培养上清液后，以 1000×g 的离心力进行 15 分钟离心操作，有效去除细胞碎片等杂质，取上清用于后续检测。若样本不能马上进行检测，需将其小心分装后，冻存于 - 20℃或 - 80℃的低温环境中，同时要坚决防止反复冻融，因为反复冻融极易导致蛋白变性，进而严重影响检测结果的准确性 。

1. 组织匀浆：取适量组织样本，加入预冷的匀浆缓冲液，在冰上进行细致的匀浆处理，确保组织充分破碎。匀浆结束后，以 12000×g 的高速离心 15 分钟，取上清用于检测。若不能及时检测，也应按照上述低温冻存及避免反复冻融的方式妥善保存样本 。

试剂盒组成

1. 预包被板：包被有抗人 MLCK/MYLK 抗体的微孔板，常见规格有 96 孔与 48 孔。96 孔板可用于检测 90 个样本和 6 个标准品复孔，48 孔板则可检测 42 个样本和 6 个标准品复孔，为不同规模的实验需求提供适配选择 。

1. 标准品：一系列已知精准浓度的人 MLCK/MYLK 标准品，用于绘制标准曲线。各厂家试剂盒的标准品浓度范围存在差异，常见的浓度梯度如 0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5ng/mL 等，借此构建准确的浓度 - 吸光度对应关系 。

1. 生物素化抗体工作液：内含生物素标记的抗 MLCK/MYLK 抗体以及相关缓冲成分，专门用于与样本中的 MLCK/MYLK 抗原特异性结合，进而形成关键的夹心结构 。

1. 酶结合物工作液：即亲和素 - HRP 溶液及缓冲液，负责连接生物素化抗体，并在后续显色反应中发挥催化作用，促使显色反应高效进行 。

1. 底物溶液：通常采用 TMB 溶液，在 HRP 的催化下能够发生明显的显色反应，使溶液颜色发生显著变化，便于直观检测 。

1. 终止液：一般为 2M 硫酸溶液，用于快速、有效地终止显色反应，使溶液颜色迅速稳定下来，为酶标仪读数提供稳定条件 。

1. 浓缩洗涤液：用于 洗涤微孔板，去除未结合的物质，以降低背景干扰。一般为 20× 浓缩液，使用时需严格按照要求进行稀释 。

1. 说明书：详细阐述试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等重要信息，是实验人员正确操作试剂盒的关键指导文件 。

1. 封板膜：在孵育过程中用于严密密封微孔板，防止溶液挥发和外界污染物进入，确保实验反应在稳定、纯净的环境中进行 。

操作步骤

1. 准备工作：从冷藏环境（2 - 8℃）取出试剂盒后，将其放置在室温（20 - 25℃）下平衡 30 分钟，使试剂盒内各试剂温度与室温一致，确保反应条件稳定。同时，按照说明书要求，准确将浓缩洗涤液稀释成工作洗涤液 。

1. 加样：合理设置标准品孔和样本孔。在标准品孔中依次加入不同浓度的标准品 50μL，动作要精准、平稳；在样本孔中加入 50μL 待测样本，若样本为血清、血浆且需稀释，应严格按照规定先进行稀释操作后再加入。每个样本和标准品均需设置复孔，通过多次测量提高检测结果的准确性 。

1. 温育：用封板膜将微孔板严密密封，随后将其平稳置于 37℃恒温培养箱中温育 30 分钟。温育期间，务必保证微孔板放置平稳，避免任何震动，为反应充分进行创造良好条件 。

1. 洗涤：小心揭去封板膜，轻柔弃去孔内液体，将微孔板倒扣在干净的吸水纸上，轻轻甩干。每孔加满工作洗涤液，静置 30 秒，使未结合物质充分洗脱，随后弃去洗涤液，如此重复洗涤 5 次。 一次洗涤后，需竭尽全力将微孔板内的残留液体甩干，防止残留洗涤液干扰后续反应 。

1. 加生物素化抗体工作液：每孔精准加入 50μL 生物素化抗体工作液，再次用封板膜封板，放入 37℃环境温育 30 分钟。操作过程中，需高度注意移液器的准确性，防止交叉污染，确保实验数据的可靠性 。

1. 二次洗涤：重复步骤 4 的洗涤操作，通过多次、 的洗涤，确保未结合的生物素化抗体被完全去除，减少背景干扰 。

1. 加酶结合物工作液：每孔加入 100μL 酶结合物工作液，加入时注意不要让液体触及孔壁，以免影响反应均一性。封板后，在 37℃温育 30 分钟 。

1. 三次洗涤：再次重复步骤 4 的洗涤操作，进一步去除未结合的酶结合物， 程度降低非特异性背景，提高检测的特异性 。

1. 显色：每孔先加入 50μL 底物 A，再加入 50μL 底物 B，加入后轻轻振荡混匀，确保底物充分混合。随后将微孔板置于 37℃避光环境下显色 15 - 20 分钟。显色时间可依据实际情况适当微调，但显色时间过长会导致本底过高，过短则会使显色不充分，均会影响结果准确性 。

1. 终止反应：每孔加入 50μL 终止液，加入瞬间溶液颜色会立即从蓝色转变为黄色。加入终止液后，应争分夺秒尽快进行读数，防止颜色发生变化影响检测结果 。

1. 读数：在终止反应后的 15 分钟内，使用预先预热并校准好的酶标仪，在 450nm 波长下读取各孔的 OD 值。读数时需确保酶标仪工作状态良好，以保证读数的准确性 。

计算方法

以标准品浓度为横坐标，对应的 OD 值为纵坐标，借助专业绘图软件或酶标仪自带的数据分析软件绘制标准曲线，常用四参数拟合曲线。依据样本的 OD 值，在标准曲线上精准查找对应的浓度。若样本是经过稀释后检测的，必须将查得的浓度乘以样本的稀释倍数，方可得到样本中 MLCK/MYLK 的实际浓度 。

试剂盒性能指标

1. 灵敏度：一般能够精准检测到 0.1ng/mL 以下浓度的 MLCK/MYLK，不同厂家生产的试剂盒灵敏度存在一定差异，部分 试剂盒灵敏度可低至 0.05ng/mL，展现出对极低浓度 MLCK/MYLK 的 检测能力 。

1. 特异性：试剂盒对人 MLCK/MYLK 具有高度特异性，与其他蛋白几乎无明显交叉反应，有力保证了检测结果反映的是人 MLCK/MYLK 的真实含量，避免其他蛋白干扰 。

1. 重复性：板内变异系数（CV）一般小于 10%，即同一批次试剂盒在同一微孔板内不同孔间检测结果的差异极小；板间变异系数小于 15%，意味着不同批次试剂盒之间检测结果的差异处于可接受范围，充分说明试剂盒具备良好的重复性和稳定性 。

1. 线性范围：在一定的浓度区间内，例如 0.312 - 10ng/mL，检测得到的 OD 值与样本中 MLCK/MYLK 的实际浓度呈现极为良好的线性关系。在此线性范围内，检测结果可靠，可用于精准计算样本中 MLCK/MYLK 的浓度 。

品牌与价格

• 上海笃玛生物科技有限公司：特异性强、灵敏度高、稳定性好、免费代测，价格需询价。