人核孔蛋白98kda(NUP98)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-5782

ELISA试剂盒优势：

1、抗体----高效、灵敏、特异性好

2、规范包被操作----吸附均匀、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

3、优化方案----重复性高，可靠性强

4、高标准技术服务要求：灵敏度高，特异性强

5、适用范围广：血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本

以下是关于人核孔蛋白98kda(NUP98)酶联免疫试剂盒的相关介绍：

1. 检测原理

采用双抗体夹心 ELISA 法，具体步骤如下：

1. 固相包被：微孔板预包被抗人 MYO 单克隆抗体，用于捕获样本中的 MYO 抗原。
2. 抗原抗体结合：加入样本后，MYO 与包被抗体特异性结合；随后加入生物素标记的抗 MYO 二抗，形成 “固相抗体 - MYO - 生物素化抗体” 夹心复合物。
3. 酶联反应：加入亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）结合物，通过生物素 - 亲和素特异性结合，将 HRP 连接至夹心复合物。
4. 显色定量：加入底物 TMB（四甲基联苯胺），HRP 催化 TMB 显色（蓝色），加入终止液（硫酸）后变为黄色，吸光度（OD 值）与 MYO 浓度呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

2. 样本类型及处理

适用样本

• 血清：室温凝固后离心（1000×g，15 分钟），取上清，避免溶血（红细胞破裂会释放 MYO，导致结果偏高）。
• 血浆：EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，离心后取上清，避免脂血。
• 组织匀浆：骨骼肌或心肌组织加入预冷匀浆缓冲液，冰上匀浆后离心（12000×g，15 分钟），取上清。
• 其他：细胞培养上清、尿液（需稀释）等，根据实验需求调整处理方法。

注意事项

• 样本保存：暂不检测的样本需分装冻存于 - 20℃或 - 80℃，避免反复冻融。
• 溶血样本：严格避免，溶血指数＞0.1% 时需重新采样。

3. 试剂盒组成

组件名称	规格 / 描述
预包被板	96 孔 / 48 孔，包被抗人 MYO 抗体，铝箔袋密封，含干燥剂。
标准品	系列浓度（如 0、25、50、100、200、400、800ng/mL），冻干品，需按说明复溶。
生物素化抗体	液体试剂，稀释后使用，特异性识别 MYO 抗原。
酶结合物工作液	亲和素 - HRP 溶液，临用前稀释。
底物溶液	TMB 溶液，避光保存，使用前平衡至室温。
终止液	2M 硫酸溶液，无色透明液体。
浓缩洗涤液	20× 浓缩液，含吐温 - 20，使用时用蒸馏水稀释至 1×。
说明书	含操作步骤、注意事项、性能参数等。

4. 操作步骤

基础流程（以 96 孔板为例）

1. 试剂准备：
   • 试剂盒从 2-8℃取出，室温平衡 30 分钟；洗涤液按 1:20 稀释。
   • 标准品复溶：加入指定体积蒸馏水，静置 10 分钟，涡旋混匀。
2. 加样：
   • 标准品孔：每孔加入 50μL 不同浓度标准品（设 2 复孔）。
   • 样本孔：每孔加入 50μL 待测样本（如需稀释，用样本稀释液预稀释）。
3. 温育与洗涤：
   • 封板，37℃温育 30 分钟；弃液，甩干，每孔加 300μL 洗涤液，静置 30 秒，弃液，重复 5 次， 拍干。
4. 酶联反应：
   • 加入 50μL 生物素化抗体工作液，37℃温育 30 分钟，洗涤 5 次。
   • 加入 100μL 酶结合物工作液，37℃温育 30 分钟，洗涤 5 次。
5. 显色与终止：
   • 加入 50μL 底物 A 和 50μL 底物 B，轻轻混匀，37℃避光显色 10-15 分钟（避免过度显色）。
   • 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处读取 OD 值（15 分钟内完成）。

数据处理

• 以标准品浓度为横坐标，OD 值（扣除空白孔）为纵坐标，绘制四参数拟合曲线，计算样本中 MYO 浓度（若样本稀释，需乘以稀释倍数）。

 应用领域

科研实验

注意事项

1. 样本干扰：
   • 高浓度胆红素（＞342μmol/L）、血红蛋白（＞5g/L）可能引起轻微干扰，需结合临床判断。
2. 操作细节：
   • 洗涤时避免交叉污染，拍干后确保孔内无残留液体，否则易导致背景偏高。
   • 底物显色需避光，终止后立即读数，超过 15 分钟颜色可能衰减。

 常见问题及解决方案

问题现象	可能原因	解决方法
标准曲线异常	标准品复溶错误 / 过期	重新配制标准品，检查保质期
样本结果为负值	样本浓度低于 检测限	报告 “＜ 检测限” 或浓缩样本后重新检测
背景信号过高	洗涤不 / 底物污染	增加洗涤次数，使用新鲜底物
重复性差	加样误差 / 温育温度不均	使用多通道移液器，确保培养箱温度稳定

 保存与运输

• 保存条件：未开封试剂盒于**2-8℃**避光保存，有效期 12 个月；开封后试剂需在 1 周内用完，避免反复冻融。
• 运输条件：冷藏运输（2-8℃），短途可用冰袋，长途需加干冰，确保试剂活性不受损。

品牌与价格

• 上海笃玛生物科技有限公司：特异性强、灵敏度高、稳定性好、免费代测，价格需询价。