人核基质蛋白22(NMP-22)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM5769

产品规格：【48T/96T】

检测原理

试剂盒组成

• 包被板：表面包被有抗人 NMP - 22 抗体的微孔板，用于捕获样本中的 NMP - 22。
• 标准品：已知浓度的人 NMP - 22 标准品，一般有多个不同浓度梯度，用于绘制标准曲线。
• 酶标抗体：酶标记的抗人 NMP - 22 抗体，用于与结合在包被板上的 NMP - 22 结合，形成可检测的复合物。
• 样本稀释液：用于稀释样本，使样本中的 NMP - 22 浓度处于试剂盒的检测范围内。
• 底物溶液：通常为过氧化物酶的底物，如四甲基联苯胺（TMB），在酶的作用下会发生颜色变化，以便进行定量分析。
• 洗涤缓冲液：主要成分是磷酸盐缓冲液（PBS）和吐温 - 20 等，用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止显色反应，使颜色稳定，便于酶标仪读数。
• 说明书：详细说明了试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项、储存条件等信息。

操作步骤

1. 样本采集与处理：根据检测目的采集合适的样本，如尿液、血清、血浆或组织匀浆等。尿液样本需新鲜采集，并离心去除杂质；血清和血浆样本需按照常规方法采集和分离，避免溶血和脂血；组织匀浆则需将组织研磨破碎后离心取上清。若不能及时检测，样本应妥善保存于 -20℃或 -80℃冰箱。
2. 试剂准备：从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（一般为 20 - 25℃）。按照说明书的要求稀释标准品、酶标抗体和样本稀释液等试剂。
3. 加样：将标准品和处理后的样本分别加入到包被板的微孔中，通常设复孔，以减少误差。加入规定体积的标准品和样本，轻轻振荡混匀，然后在规定的温度（如 37℃）下孵育一定时间（通常为 1 - 2 小时）。
4. 加酶标抗体：孵育结束后，弃去孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板 3 - 5 次，每次浸泡数分钟，然后拍干或甩干。接着向各孔加入稀释好的酶标抗体，振荡混匀后，再次在规定温度下孵育（一般为 30 - 60 分钟）。
5. 洗涤：重复洗涤步骤，以去除未结合的酶标抗体和其他杂质。
6. 显色：向各孔加入底物溶液，轻轻振荡混匀，然后在避光条件下室温孵育（一般为 15 - 30 分钟），观察颜色变化。随着反应的进行，溶液会逐渐显色。
7. 终止反应：当颜色变化达到合适程度时，向每孔加入终止液，振荡混匀，终止显色反应。此时溶液颜色应稳定，不再变化。
8. 读数：立即将微孔板放入酶标仪中，在规定的波长下测定各孔的吸光度值（OD 值）。通常使用 450nm 波长，若有特殊要求，说明书会另行注明。
9. 结果计算：根据标准品的浓度和对应的吸光度值绘制标准曲线。然后将样本的吸光度值代入标准曲线方程，计算出样本中 NMP - 22 的浓度。也可使用酶标仪自带的软件进行标准曲线绘制和结果计算。

注意事项

• 试剂盒保存：试剂盒应保存在 2 - 8℃的环境中，避免冷冻和高温。不同试剂盒的有效期可能不同，使用前应检查试剂盒是否在有效期内。
• 操作规范：严格按照说明书的操作步骤进行实验，包括加样量、孵育时间、温度和洗涤次数等，以确保实验结果的准确性和重复性。
• 避免交叉污染：使用干净的移液器和吸头，不同样本和试剂之间避免交叉污染。加样时应注意不要触及孔壁和孔底，以免影响结果。
• 试剂质量：不同批次的试剂盒试剂不能混用，以免产生误差。使用前应检查试剂是否有变色、沉淀或浑浊等异常现象，如有异常，应及时更换试剂。
• 显色条件：底物溶液应现用现配，显色反应需在避光条件下进行，以防止底物被氧化而影响显色效果。
• 安全防护：实验过程中使用的试剂可能具有一定的毒性或腐蚀性，如终止液中的硫酸溶液，应注意安全防护，避免接触皮肤和眼睛。如不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。

类型

操作步骤

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。