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人S100钙结合蛋白A12(S100A12 )酶联免疫试剂盒
  • 品牌：DUMABIO
  • 产地：上海
  • 型号：96T
  • 货号：DM5702
  • 发布日期： 2025-04-11
  • 更新日期： 2025-04-11
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产地 上海
保存条件 2-8°
品牌 DUMABIO
货号 DM5702
用途 科研实验
检测方法
保质期 6个月
适应物种
检测限
数量
英文名称
包装规格 96T
标记物
样本
应用
是否进口 否

人S100钙结合蛋白A12(S100A12 )酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM5702

产品规格：【48T/96T】


以下是一般情况下人 S100 钙结合蛋白 A12（S100A12）酶联免疫试剂盒的操作步骤：
  1. 准备工作
    • 从冰箱中取出试剂盒，在室温下平衡 30 - 60 分钟，使试剂盒中的试剂达到室温。同时将所需的微孔板条插入微孔板框架中。
    • 计算所需的标准品、样本和试剂的用量，并准备好相应的容器和移液器。
    • 按照说明书的要求，将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释成工作洗涤液。
  2. 加样
    • 标准品加样：在微孔板的标准品孔中分别加入不同浓度的标准品，通常为 5 - 6 个不同浓度梯度，每个浓度设 2 - 3 个复孔。一般每孔加入 100μl 标准品。
    • 样本加样：将待测样本按照一定的稀释比例用样本稀释液稀释后，加入到微孔板的样本孔中，每孔 100μl，同样设 2 - 3 个复孔。如果样本数量较多，可使用多通道移液器进行加样，以提高加样速度和准确性。
  3. 温育
    • 加样完成后，用封板膜将微孔板密封，防止液体蒸发和外界杂质污染。然后将微孔板放入 37℃恒温培养箱中温育，温育时间通常为 1 - 2 小时，具体时间根据试剂盒说明书而定。温育过程中，样本中的 S100A12 蛋白与包被在微孔板上的抗体充分结合。
  4. 洗涤
    • 温育结束后，小心揭去封板膜，将微孔板中的液体弃去，并在吸水纸上拍干。然后每孔加入 300 - 400μl 洗涤液，静置 1 - 2 分钟后，将洗涤液弃去，重复洗涤 3 - 5 次。洗涤的目的是去除未结合的物质，包括未结合的样本蛋白、标准品以及其他杂质，以降低背景信号，提高检测的准确性。
  5. 加酶标抗体
    • 洗涤完成后，在每孔中加入 100μl 酶标抗体。加酶标抗体时要注意避免产生气泡，加样后轻轻振荡微孔板，使酶标抗体与孔内的物质充分混合。然后再次用封板膜密封微孔板，放入 37℃恒温培养箱中温育，温育时间一般为 30 - 60 分钟。在此过程中，酶标抗体与已结合在微孔板上的 S100A12 蛋白特异性结合，形成夹心复合物。
  6. 洗涤
    • 同步骤 4，再次用洗涤液洗涤微孔板 3 - 5 次，以去除未结合的酶标抗体，避免非特异性显色。
  7. 显色
    • 洗涤完成后，每孔加入 100μl 底物溶液。加入底物后，轻轻振荡微孔板，使底物与酶标抗体充分接触反应。然后将微孔板放入暗处室温下反应 15 - 30 分钟，具体反应时间根据试剂盒说明书和颜色变化情况而定。在酶的催化作用下，底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 S100A12 蛋白的含量成正比。
  8. 终止反应
    • 当显色达到适当的程度时，每孔加入 50 - 100μl 终止液，终止酶催化的显色反应。加入终止液后，溶液的颜色会立即发生变化，如由蓝色变为黄色（以 TMB 底物为例）。终止反应后，应尽快在酶标仪上读取吸光度。
  9. 结果测定
    • 使用酶标仪在特定波长下（通常为 450nm，若有双波长检测，参考波长一般为 630nm）测定各孔的吸光度值（OD 值）。读取吸光度时，要确保酶标仪的准确性和稳定性，并按照酶标仪的操作说明书进行操作。
  10. 数据分析
    • 根据标准品的浓度和对应的吸光度值，绘制标准曲线。通常使用四参数逻辑回归（4 - PL）等方法进行曲线拟合。然后根据样本的吸光度值，从标准曲线上计算出样本中 S100A12 蛋白的浓度。如果样本经过稀释，还需要乘以相应的稀释倍数，得到样本中实际的 S100A12 蛋白浓度。

工作原理

主要基于抗原 - 抗体的特异性结合反应以及酶的高效催化作用。其基本步骤和原理如下：

1. 抗原或抗体包被：将已知的抗原或抗体固定在微孔板的表面。

2. 样本孵育：加入待检测样本，若样本中存在目标抗原或抗体，就会与包被在微孔板上的抗体或抗原结合。

3. 洗涤：用洗涤液冲洗微孔板，去除未结合的物质。

4. 酶标记物孵育：加入酶标记的抗体或抗原，它会与结合在微孔板上的目标物结合。

5. 再次洗涤：去除未结合的酶标记物。

6. 底物显色：加入底物，酶催化底物反应，产生可检测的信号，如颜色变化。

7. 终止反应：加入终止液，终止酶促反应。

8. 检测：使用酶标仪检测吸光度值，通过与标准曲线对比，确定样本中目标物的含量。




生产厂家：上海笃玛生物科技有限公司






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