检测原理

• 通常采用双抗体夹心 ELISA 法。试剂盒中的微孔板预先包被有抗人 S100B 蛋白的特异性抗体。加入样本后，样本中的 S100B 蛋白会与包被抗体结合。然后加入酶标抗体，它能特异性地识别并结合已与包被抗体结合的 S100B 蛋白，形成 “包被抗体 - S100B 蛋白 - 酶标抗体” 的夹心复合物。加入底物后，酶标抗体上的酶催化底物发生显色反应，颜色深浅与样本中 S100B 蛋白的含量成正比。通过酶标仪测定吸光度，参照标准曲线即可计算出样本中 S100B 蛋白的浓度。

试剂盒组成

• 微孔板：已包被抗 S100B 抗体，为反应提供固相载体。
• 标准品：一系列已知浓度的 S100B 蛋白标准品，用于绘制标准曲线。
• 酶标抗体：与 S100B 蛋白特异性结合的抗体，偶联有酶，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）。
• 底物溶液：如四甲基联苯胺（TMB）等，在酶的作用下发生显色反应。
• 洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性干扰。
• 终止液：用于终止酶催化的显色反应，使颜色稳定，便于酶标仪读数。
• 其他辅助试剂：如样本稀释液、浓缩洗涤液等。

质量控制

· 设置对照：在每次检测中，都要设置阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照用于验证试剂盒的有效性和检测系统的正常运行；阴性对照用于检测是否存在非特异性反应；空白对照用于扣除背景信号。通过对照样本的检测结果，可以判断检测过程是否可靠。

· 绘制标准曲线：使用标准品绘制准确的标准曲线，标准品的浓度应覆盖样本中目标物的可能浓度范围。在绘制标准曲线时，要确保标准品的稀释准确，每个浓度至少设置 2 - 3 个复孔。通过标准曲线可以对样本中的目标物进行定量分析，标准曲线的线性关系和拟合度直接影响定量结果的准确性。

· 重复检测：对重要样本或检测结果有疑问的样本，进行重复检测。通过多次检测可以减少偶然误差，提高检测结果的可靠性。同时，计算多次检测结果的平均值和标准差，评估检测结果的重复性。

人员培训

· 专业培训：操作人员应接受专业的 ELISA 技术培训，熟悉 ELISA 的原理、操作流程和质量控制要求。培训内容包括试剂盒的使用方法、仪器设备的操作技巧、实验数据的处理和分析等。

· 持续学习：随着技术的不断发展和更新，操作人员要持续学习相关知识和技能，了解 ELISA 技术的 进展和应用，不断提高自身的专业水平。