检测原理

• 一般采用双抗体夹心酶联免疫吸附法。试剂盒的微孔板上预包被有针对 S100A7 的特异性抗体。加入样本后，样本中的 S100A7 蛋白与包被抗体结合。接着加入酶标抗体，它会特异性地结合到已与包被抗体结合的 S100A7 蛋白上，形成 “包被抗体 - S100A7 - 酶标抗体” 复合物。加入底物后，酶标抗体上的酶催化底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 S100A7 蛋白的含量呈正相关。通过酶标仪测定吸光度，并与标准曲线对比，就能计算出样本中 S100A7 蛋白的浓度。

试剂盒组成

• 微孔板：表面已包被抗 S100A7 抗体，用于固定样本中的 S100A7 蛋白。
• 标准品：已知浓度的 S100A7 蛋白标准品，通常有多个不同浓度梯度，用于绘制标准曲线。
• 酶标抗体：与 S100A7 蛋白特异性结合的抗体，连接有酶，如辣根过氧化物酶（HRP），可催化底物显色。
• 底物溶液：如常用的四甲基联苯胺（TMB）溶液，在酶的作用下会发生颜色变化，便于检测。
• 洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，降低背景干扰。
• 终止液：用于终止酶催化的显色反应，使颜色稳定，以便准确读取吸光度。
• 其他试剂：可能包括样本稀释液、浓缩洗涤液等，以辅助完成检测过程。

样本类型

• 血清：通过待血液自然凝固后离心得到，血清中含有多种蛋白质，包括 S100A7，是常用的检测样本。
• 血浆：使用抗凝剂采集血液后离心获得，抗凝剂的选择需根据试剂盒要求，如 EDTA、肝素等抗凝血浆都可用于检测，但不同抗凝剂可能对检测结果有轻微影响。
• 组织匀浆：将组织样本经过研磨、匀浆等处理后得到，可用于检测组织中 S100A7 的表达水平，有助于了解该蛋白在不同组织中的分布和功能。
• 细胞培养上清：细胞在培养过程中分泌到培养基中的成分，可用于研究细胞对 S100A7 蛋白的分泌情况，以及在细胞实验中检测药物等因素对 S100A7 分泌的影响。

质量控制

· 设置对照：在每次检测中，都要设置阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照用于验证试剂盒的有效性和检测系统的正常运行；阴性对照用于检测是否存在非特异性反应；空白对照用于扣除背景信号。通过对照样本的检测结果，可以判断检测过程是否可靠。

· 绘制标准曲线：使用标准品绘制准确的标准曲线，标准品的浓度应覆盖样本中目标物的可能浓度范围。在绘制标准曲线时，要确保标准品的稀释准确，每个浓度至少设置 2 - 3 个复孔。通过标准曲线可以对样本中的目标物进行定量分析，标准曲线的线性关系和拟合度直接影响定量结果的准确性。

· 重复检测：对重要样本或检测结果有疑问的样本，进行重复检测。通过多次检测可以减少偶然误差，提高检测结果的可靠性。同时，计算多次检测结果的平均值和标准差，评估检测结果的重复性。

人员培训

· 专业培训：操作人员应接受专业的 ELISA 技术培训，熟悉 ELISA 的原理、操作流程和质量控制要求。培训内容包括试剂盒的使用方法、仪器设备的操作技巧、实验数据的处理和分析等。

· 持续学习：随着技术的不断发展和更新，操作人员要持续学习相关知识和技能，了解 ELISA 技术的 进展和应用，不断提高自身的专业水平。