人富含半胱氨酸型酸性蛋白(SPARC)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM5694

检测原理

• 该试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 原理。试剂盒中的微孔板预先包被有抗人 Cyr61 的特异性抗体。当加入待测样本时，样本中的 Cyr61 蛋白会与包被在微孔板上的抗体特异性结合。然后加入酶标抗体，它会识别并结合已结合在包被抗体上的 Cyr61 蛋白的另一个抗原位点，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。加入底物后，在酶的催化作用下，底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 Cyr61 的含量成正比。通过酶标仪测定吸光度值，再与标准曲线进行对比，即可计算出样本中 Cyr61 的浓度。

试剂盒组成

• 预包被板：通常为 96 孔或 48 孔的微孔板，表面已预包被抗人 Cyr61 抗体，用于特异性捕获样本中的 Cyr61 蛋白。
• 标准品：一系列已知浓度的人 Cyr61 蛋白标准品，用于绘制标准曲线，以便对样本中的 Cyr61 进行定量分析。
• 酶标工作液：含有辣根过氧化物酶（HRP）等标记的抗人 Cyr61 抗体，能够与结合在包被抗体上的 Cyr61 蛋白特异性结合，形成可被检测的复合物。
• 底物溶液：一般为四甲基联苯胺（TMB）溶液，在 HRP 的催化作用下会发生显色反应，通常为无色透明液体，显色后可通过酶标仪进行检测。
• 终止液：通常为硫酸溶液，用于终止底物的显色反应，使溶液颜色稳定，便于准确测量吸光度值。
• 样本稀释液：用于稀释血清、血浆、细胞培养上清等样本，使样本中 Cyr61 的浓度处于试剂盒的 检测范围内，同时保证样本的酸碱度和离子强度等条件适合检测。
• 洗涤液：多为含有吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附，以提高检测的准确性。

工作原理

主要基于抗原 - 抗体的特异性结合反应以及酶的高效催化作用。其基本步骤和原理如下：

1. 抗原或抗体包被：将已知的抗原或抗体固定在微孔板的表面。

2. 样本孵育：加入待检测样本，若样本中存在目标抗原或抗体，就会与包被在微孔板上的抗体或抗原结合。

3. 洗涤：用洗涤液冲洗微孔板，去除未结合的物质。

4. 酶标记物孵育：加入酶标记的抗体或抗原，它会与结合在微孔板上的目标物结合。

5. 再次洗涤：去除未结合的酶标记物。

6. 底物显色：加入底物，酶催化底物反应，产生可检测的信号，如颜色变化。

7. 终止反应：加入终止液，终止酶促反应。

8. 检测：使用酶标仪检测吸光度值，通过与标准曲线对比，确定样本中目标物的含量。

质量控制

· 设置对照：在每次检测中，都要设置阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照用于验证试剂盒的有效性和检测系统的正常运行；阴性对照用于检测是否存在非特异性反应；空白对照用于扣除背景信号。通过对照样本的检测结果，可以判断检测过程是否可靠。

· 绘制标准曲线：使用标准品绘制准确的标准曲线，标准品的浓度应覆盖样本中目标物的可能浓度范围。在绘制标准曲线时，要确保标准品的稀释准确，每个浓度至少设置 2 - 3 个复孔。通过标准曲线可以对样本中的目标物进行定量分析，标准曲线的线性关系和拟合度直接影响定量结果的准确性。

· 重复检测：对重要样本或检测结果有疑问的样本，进行重复检测。通过多次检测可以减少偶然误差，提高检测结果的可靠性。同时，计算多次检测结果的平均值和标准差，评估检测结果的重复性。

人员培训

· 专业培训：操作人员应接受专业的 ELISA 技术培训，熟悉 ELISA 的原理、操作流程和质量控制要求。培训内容包括试剂盒的使用方法、仪器设备的操作技巧、实验数据的处理和分析等。

· 持续学习：随着技术的不断发展和更新，操作人员要持续学习相关知识和技能，了解 ELISA 技术的 进展和应用，不断提高自身的专业水平。

生产厂家：上海笃玛生物科技有限公司