检测原理

• 人蛋白酶激活受体 4（PAR4）酶联免疫试剂盒通常采用双抗体夹心 ELISA 法。在微孔板上预包被抗人 PAR4 的单克隆抗体，当加入待测样本时，样本中的 PAR4 抗原会与包被在微孔板上的抗体特异性结合。然后加入酶标记的抗人 PAR4 多克隆抗体，它会与已结合在包被抗体上的 PAR4 抗原形成抗体 - 抗原 - 抗体复合物。 加入底物溶液，在酶的催化作用下，底物发生显色反应，通过酶标仪检测吸光度值，吸光度与样本中 PAR4 的含量成正比，从而可以根据标准曲线计算出样本中 PAR4 的浓度。

试剂盒组成

• 预包被板：一般为 96 孔或 48 孔的聚苯乙烯微孔板，表面均匀包被有抗人 PAR4 抗体，用于捕获样本中的 PAR4 抗原。
• 标准品：一系列已知浓度的人 PAR4 蛋白标准品，通常包括多个浓度梯度，如 0 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL 等，用于绘制标准曲线，以便对样本中的 PAR4 进行定量分析。
• 酶标工作液：含有辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等标记的抗人 PAR4 抗体，能够与结合在包被抗体上的 PAR4 抗原特异性结合，在后续反应中催化底物显色。
• 底物溶液：根据标记酶的不同，底物溶液有所不同。如 HRP 标记的酶标抗体通常使用四甲基联苯胺（TMB）作为底物，AP 标记的则常用对硝基苯磷酸酯（p - NPP）作为底物。底物在酶的作用下会发生显色反应，生成可被酶标仪检测到的有色产物。
• 终止液：用于终止底物的显色反应。对于 TMB 底物，终止液一般为硫酸溶液，加入终止液后，反应液颜色由蓝色变为黄色，且在特定波长下的吸光度值稳定，便于准确测量。
• 样本稀释液：用于稀释血清、血浆、细胞培养上清液等样本，使样本中的 PAR4 抗原浓度处于试剂盒的检测范围内，同时保持样本的稳定性和生物活性。
• 洗涤液：通常是含有吐温 - 20 等表面活性剂的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于在实验过程中洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附，提高检测的特异性和准确性。