检测原理

试剂盒组成

• 包被板：通常为 96 孔或 48 孔的微孔板，表面包被有抗人 SAA3 抗体。
• 标准品：一系列已知浓度的 SAA3 标准品，用于绘制标准曲线，一般包括多个浓度梯度，如 0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 等。
• 酶标抗体：标记有辣根过氧化物酶（HRP）或其他酶的抗人 SAA3 抗体，用于与结合在包被抗体上的 SAA3 抗原结合，催化底物显色。
• 底物溶液：如常用的四甲基联苯胺（TMB）底物，在酶的作用下会发生显色反应，生成蓝色产物。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止底物的显色反应，使反应液颜色由蓝色变为黄色。
• 样本稀释液：用于稀释样本，使样本中 SAA3 的浓度处于试剂盒的检测范围内，并保持样本的稳定性。
• 洗涤液：通常是含有吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附。

操作步骤

1. 试剂准备：从冰箱中取出试剂盒，在室温下平衡 30 - 60 分钟。按照说明书的要求配制各种试剂，包括稀释标准品、准备样本稀释液、酶标抗体工作液和洗涤液等。
2. 加样：将标准品和待测样本加入到包被板的相应孔中，标准品通常设复孔，同时设置空白对照孔。加样时应使用移液器准确加样，避免加样量不准确或产生气泡。
3. 温育：将微孔板放入恒温箱中，在规定的温度（如 37℃）下温育一定时间（通常为 1 - 2 小时），以使 SAA3 抗原与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板 3 - 5 次，每次洗涤后要拍干，以去除未结合的物质。
5. 加酶标抗体：向各孔中加入适量的酶标抗体工作液，轻轻振荡使液体均匀分布，确保酶标抗体与 SAA3 抗原充分结合。
6. 二次温育与洗涤：再次将微孔板放入恒温箱中温育，温育后重复洗涤步骤。
7. 显色：加入底物溶液，轻轻振荡后将微孔板置于避光处显色，显色时间根据底物和试剂盒的要求而定，一般为 15 - 30 分钟。
8. 终止反应：显色达到合适程度时，加入终止液，终止显色反应。
9. 读数：使用酶标仪在规定的波长（如 450 nm）下测定各孔的吸光度值。根据标准品的吸光度值绘制标准曲线，然后根据标准曲线计算出待测样本中 SAA3 的浓度。

注意事项

1. 试剂盒应在 2 - 8℃保存，避免冷冻和反复冻融，使用前需平衡至室温。
2. 加样操作要准确、规范，使用经过校准的移液器，并及时更换吸头，防止交叉污染。
3. 温育过程中要保持恒温箱温度稳定，微孔板放置要平稳。
4. 洗涤要充分，但要避免过度洗涤破坏免疫复合物，洗涤液应现用现配。
5. 显色反应需在避光条件下进行，严格控制显色时间，避免显色过度或不足。
6. 不同批次的试剂盒可能存在差异，尽量使用同一批次的试剂盒完成实验。如需更换批次，应重新绘制标准曲线。
7. 注意个人防护，避免接触底物溶液和终止液等具有腐蚀性的试剂。
8. 样本的采集、处理和保存要规范。血清或血浆样本应避免溶血、脂血等，采集后应尽快分离，并在规定时间内进行检测。不能及时检测的样本应妥善保存，一般可在 - 20℃或 - 80℃下保存，但要避免反复冻融。