SPP1 基本信息

ELISA 检测试剂盒原理

1. 包被抗体结合抗原：微孔板预先包被了针对小鼠 SPP1 的特异性捕获抗体。当加入小鼠样本（如血清、血浆、组织匀浆等）后，样本中的 SPP1 会与包被在微孔板上的捕获抗体特异性结合。
2. 酶标抗体结合：随后加入酶标记的另一种抗小鼠 SPP1 的检测抗体，它会与已经结合在捕获抗体上的 SPP1 结合，从而形成 “捕获抗体 - SPP1 - 酶标抗体” 复合物。
3. 显色与检测：加入底物溶液，酶催化底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 SPP1 的含量成正比。 通过酶标仪在特定波长下测定吸光度，与标准曲线对比，就能计算出样本中 SPP1 的浓度。

使用步骤（一般流程）

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 18 - 25℃）。按说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，样本孔加入待测的小鼠样本，空白对照孔加入稀释液，均设复孔以保证结果准确性。
3. 温育：用封板膜封好微孔板，放入 37℃孵箱中温育一定时间（通常 1 - 2 小时），使 SPP1 与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次（一般 3 - 5 次），每次洗涤后需拍干孔内残留液体。
5. 加酶标记抗体：每孔加入酶标记抗体工作液，再次封板，37℃温育一定时间。
6. 再次洗涤：重复洗涤步骤， 去除未结合的酶标记抗体。
7. 加底物显色：每孔加入底物溶液，室温避光放置一段时间（如 15 - 30 分钟），此时会发生显色反应，溶液颜色逐渐变蓝。
8. 终止反应：加入终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。

注意事项

1. 严格按说明书操作：操作过程中的温育时间、温度、洗涤次数等都要严格按照说明书进行，否则会影响检测结果的准确性。
2. 样本处理与保存：样本采集后应尽快检测，若不能及时检测，需按说明书要求妥善保存（如 - 20℃或 - 80℃冷冻保存），并避免样本反复冻融，以免影响 SPP1 的活性。同时要防止样本受到污染，如溶血、脂血等情况可能干扰检测。
3. 防止交叉污染：实验中要使用一次性吸头，避免不同样本之间交叉污染；加样槽等器具也要及时更换或清洗。