试剂盒检测原理

1. 包被抗体结合：微孔板预先包被了针对小鼠巴豆酰辅酶 A 的特异性抗体。当加入小鼠样本（如血清、血浆、组织匀浆等）后，样本中的巴豆酰辅酶 A 会与包被在微孔板上的抗体特异性结合。
2. 酶标抗体结合：接着加入酶标记的另一种抗小鼠巴豆酰辅酶 A 抗体，它会与已经结合在包被抗体上的巴豆酰辅酶 A 结合，形成 “包被抗体 - 巴豆酰辅酶 A - 酶标抗体” 复合物。
3. 显色与检测：加入底物溶液，酶催化底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中巴豆酰辅酶 A 的含量成正比。 通过酶标仪在特定波长下测定吸光度，与标准曲线对比，就能计算出样本中巴豆酰辅酶 A 的浓度。

试剂盒组成

1. 包被微孔板：一般为 96 孔或 48 孔，已包被抗小鼠巴豆酰辅酶 A 的抗体。
2. 标准品：一系列已知浓度的巴豆酰辅酶 A 标准溶液，用于绘制标准曲线。
3. 酶标记抗体：与小鼠巴豆酰辅酶 A 特异性结合且连接有酶（如辣根过氧化物酶）的抗体。
4. 底物溶液：在酶的作用下会发生显色反应的溶液，常见的如 TMB（四甲基联苯胺）。
5. 洗涤液：用于洗去未结合的物质，通常为浓缩液，使用前需按要求稀释。
6. 终止液：用于终止酶促反应，使颜色稳定以便测量吸光度，例如硫酸溶液。
7. 封板膜：在温育过程中用于密封微孔板，防止液体蒸发和污染。
8. 说明书：详细说明试剂盒的使用方法、注意事项、储存条件等内容。

使用步骤（一般流程）

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 18 - 25℃）。按说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，样本孔加入待测的小鼠样本，空白对照孔加入稀释液，均设复孔以保证结果准确性。
3. 温育：用封板膜封好微孔板，放入 37℃孵箱中温育一定时间（通常 1 - 2 小时），使巴豆酰辅酶 A 与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次（一般 3 - 5 次），每次洗涤后需拍干孔内残留液体。
5. 加酶标记抗体：每孔加入酶标记抗体工作液，再次封板，37℃温育一定时间。
6. 再次洗涤：重复洗涤步骤， 去除未结合的酶标记抗体。
7. 加底物显色：每孔加入底物溶液，室温避光放置一段时间（如 15 - 30 分钟），此时会发生显色反应，溶液颜色逐渐变蓝。
8. 终止反应：加入终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。
9. 测量吸光度：使用酶标仪在特定波长（如 450nm）下测定各孔吸光度值。
10. 结果计算：以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本的吸光度值在标准曲线上查得对应的巴豆酰辅酶 A 浓度。