小鼠（Mouse）D-乳糖（D-Lactose）ELISA检测试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6762

产品规格：【48T/96T】

D - 乳糖简介

检测原理

1. 微孔板预先包被有抗 D - 乳糖的特异性抗体。
2. 将含有已知量酶标记 D - 乳糖的工作液与小鼠样本（如血清、乳汁等）同时加入微孔板中。样本中的 D - 乳糖和酶标记的 D - 乳糖会竞争结合包被在微孔板上的抗体。样本中 D - 乳糖含量越高，与包被抗体结合的酶标记 D - 乳糖就越少。
3. 洗涤去除未结合的物质后，加入底物溶液。酶标记的 D - 乳糖上的酶会催化底物发生显色反应。由于样本中 D - 乳糖和酶标记 D - 乳糖的竞争关系，最终颜色的深浅与样本中 D - 乳糖的含量成反比。通过酶标仪在特定波长下测定吸光度，与标准曲线对比，即可计算出样本中 D - 乳糖的浓度。

试剂盒组成

1. 包被微孔板：通常为 96 孔或 48 孔，已包被抗 D - 乳糖的抗体。
2. 标准品：一系列已知浓度的 D - 乳糖标准溶液，用于绘制标准曲线。
3. 酶标记 D - 乳糖：连接有酶（如辣根过氧化物酶）的 D - 乳糖。
4. 底物溶液：在酶的作用下会发生显色反应的溶液，常见的如 TMB（四甲基联苯胺）。
5. 洗涤液：用于洗去未结合的物质，一般为浓缩液，使用前需按要求稀释。
6. 终止液：用于终止酶促反应，使颜色稳定以便测量吸光度，例如硫酸溶液。
7. 封板膜：在温育过程中用于密封微孔板，防止液体蒸发和污染。
8. 说明书：详细说明试剂盒的使用方法、注意事项、储存条件等内容。

使用步骤（一般流程）

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 18 - 25℃）。按说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品与酶标记 D - 乳糖工作液的混合液，样本孔加入小鼠样本与酶标记 D - 乳糖工作液的混合液，空白对照孔加入稀释液与酶标记 D - 乳糖工作液的混合液，均设复孔。
3. 温育：用封板膜封好微孔板，放入 37℃孵箱中温育一定时间（通常 1 - 2 小时），使竞争结合反应充分进行。
4. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次（一般 3 - 5 次），每次洗涤后需拍干孔内残留液体。
5. 加底物显色：每孔加入底物溶液，室温避光放置一段时间（如 15 - 30 分钟），此时会发生显色反应，溶液颜色逐渐变蓝。
6. 终止反应：加入终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。
7. 测量吸光度：使用酶标仪在特定波长（如 450nm）下测定各孔吸光度值。
8. 结果计算：以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本的吸光度值在标准曲线上查得对应的 D - 乳糖浓度。

注意事项

1. 严格按说明书操作：整个实验过程中的温育时间、温度、洗涤次数等都要严格按照说明书进行，任何操作不当都可能影响检测结果的准确性。
2. 样本处理与保存：样本采集后应尽快检测，若不能及时检测，需按说明书要求妥善保存（如 - 20℃或 - 80℃冷冻保存），并避免样本反复冻融，以免影响 D - 乳糖的稳定性。同时要防止样本受到污染，如乳汁样本要避免微生物污染等情况。
3. 防止交叉污染：实验中要使用一次性吸头，避免不同样本之间交叉污染；加样槽等器具也要及时更换或清洗。
4. 试剂保存：试剂盒中的试剂需在规定温度下保存，过期试剂不能使用，不同批号的试剂盒也不能混用。
5. 酶标仪校准：酶标仪需要定期校准，以确保吸光度测量的准确性。