GAP - 43 简介

检测原理

1. 包被抗体结合抗原：微孔板预先包被了抗小鼠 GAP - 43 的特异性抗体。当加入小鼠样本（如血清、血浆、脑脊液、组织匀浆等）后，样本中的 GAP - 43 会与包被在微孔板上的抗体特异性结合。
2. 酶标抗体结合：然后加入酶标记的另一种抗小鼠 GAP - 43 抗体，它会与已经结合在包被抗体上的 GAP - 43 结合，形成 “包被抗体 - GAP - 43 - 酶标抗体” 复合物。
3. 显色与定量：加入底物溶液，酶催化底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 GAP - 43 的含量成正比。通过酶标仪在特定波长（如 450nm）下测定吸光度，再与标准曲线对比，就能计算出样本中 GAP - 43 的浓度。

试剂盒组成

1. 包被微孔板：一般为 96 孔或 48 孔，已包被抗小鼠 GAP - 43 抗体。
2. 标准品：一系列已知浓度的 GAP - 43 标准溶液，用于绘制标准曲线。
3. 酶标记抗体：与小鼠 GAP - 43 特异性结合且连接有酶（如辣根过氧化物酶）的抗体。
4. 底物溶液：在酶的作用下会发生显色反应的溶液，常见的是 TMB（四甲基联苯胺）。
5. 洗涤液：用于洗去未结合的物质，通常为浓缩液，使用前需按要求稀释。
6. 终止液：用于终止酶促反应，使颜色稳定以便测量吸光度，一般是硫酸溶液。
7. 封板膜：在温育过程中用于密封微孔板，防止液体蒸发和污染。
8. 说明书：详细说明试剂盒的使用方法、注意事项、储存条件等。

使用步骤（一般流程）

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 18 - 25℃）。按照说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，样本孔加入待测的小鼠样本，空白对照孔加入稀释液，均设置复孔以确保结果的准确性。
3. 温育：用封板膜封好微孔板，放入 37℃孵箱中温育一定时间（通常 1 - 2 小时），使 GAP - 43 与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次（一般 3 - 5 次），每次洗涤后需拍干孔内残留液体。
5. 加酶标记抗体：每孔加入酶标记抗体工作液，再次封板，37℃温育一定时间。
6. 再次洗涤：重复洗涤步骤， 去除未结合的酶标记抗体。
7. 加底物显色：每孔加入底物溶液，室温避光放置一段时间（如 15 - 30 分钟），此时会发生显色反应，溶液颜色逐渐变蓝。
8. 终止反应：加入终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。
9. 测量吸光度：使用酶标仪在特定波长（如 450nm）下测定各孔吸光度值。
10. 结果计算：以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本的吸光度值在标准曲线上查得对应的 GAP - 43 浓度。

注意事项

1. 严格按说明书操作：整个实验过程中的温育时间、温度、洗涤次数等操作细节都要严格按照说明书进行，任何偏差都可能影响检测结果的准确性。
2. 样本处理与保存：样本采集后应尽快检测，若不能及时检测，需按照说明书要求妥善保存（如 - 20℃或 - 80℃冷冻保存），并避免样本反复冻融，以免影响 GAP - 43 的活性。同时要防止样本受到污染，如溶血、脂血等情况可能干扰检测。
3. 防止交叉污染：实验中要使用一次性吸头，避免不同样本之间交叉污染；加样槽等器具也要及时更换或清洗。
4. 试剂保存：试剂盒中的试剂需在规定温度下保存，过期试剂不能使用，不同批号的试剂盒也不能混用。
5. 酶标仪校准：酶标仪需要定期校准，以确保吸光度测量的准确性。