PSD95 的生物学意义

检测原理

1. 包被抗体结合抗原：微孔板预先包被了针对小鼠 PSD95 的特异性捕获抗体。当加入小鼠样本（如脑组织匀浆、脑脊液、血清等）后，样本中的 PSD95 会与包被在微孔板上的捕获抗体特异性结合。
2. 酶标抗体结合：接着加入酶标记的另一种抗小鼠 PSD95 的检测抗体，它会与已经结合在捕获抗体上的 PSD95 结合，从而形成 “捕获抗体 - PSD95 - 酶标抗体” 复合物。
3. 显色与定量：加入底物溶液，酶催化底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 PSD95 的含量成正比。 通过酶标仪在特定波长（通常为 450nm）下测定吸光度，与预先绘制好的标准曲线对比，就能计算出样本中 PSD95 的浓度。

试剂盒组成

1. 包被微孔板：一般为 96 孔或 48 孔的微孔板，已包被抗小鼠 PSD95 的捕获抗体。
2. 标准品：一系列已知浓度的 PSD95 标准溶液，用于绘制标准曲线。
3. 酶标记抗体：与小鼠 PSD95 特异性结合且连接有酶（如辣根过氧化物酶）的检测抗体。
4. 底物溶液：在酶的作用下会发生显色反应的溶液，常见的是 TMB（四甲基联苯胺）。
5. 洗涤液：用于洗去未结合的物质，通常为浓缩液，使用前需按要求稀释。
6. 终止液：用于终止酶促反应，使颜色稳定以便测量吸光度，一般是硫酸溶液。
7. 封板膜：在温育过程中用于密封微孔板，防止液体蒸发和污染。
8. 说明书：详细说明试剂盒的使用方法、注意事项、储存条件等内容。

使用步骤（一般流程）

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（约 18 - 25℃）。按照说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，样本孔加入待测的小鼠样本，空白对照孔加入稀释液，均设置复孔以确保结果的准确性。
3. 温育：用封板膜封好微孔板，放入 37℃孵箱中温育一定时间（通常 1 - 2 小时），使 PSD95 与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次（一般 3 - 5 次），每次洗涤后需拍干孔内残留液体。
5. 加酶标记抗体：每孔加入酶标记抗体工作液，再次封板，37℃温育一定时间。
6. 再次洗涤：重复洗涤步骤， 去除未结合的酶标记抗体。
7. 加底物显色：每孔加入底物溶液，室温避光放置一段时间（如 15 - 30 分钟），此时会发生显色反应，溶液颜色逐渐变蓝。
8. 终止反应：加入终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。
9. 测量吸光度：使用酶标仪在特定波长（如 450nm）下测定各孔吸光度值。
10. 结果计算：以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本的吸光度值在标准曲线上查得对应的 PSD95 浓度。

注意事项

1. 严格按说明书操作：实验过程中的每一个步骤，包括温育时间、温度、洗涤次数等，都要严格遵循说明书要求，任何偏差都可能导致检测结果不准确。
2. 样本处理与保存：样本采集后应尽快检测，若不能及时检测，需按照说明书要求妥善保存（如 - 20℃或 - 80℃冷冻保存），并避免样本反复冻融，以免影响 PSD95 的稳定性和检测结果。同时，要防止样本受到污染，如溶血、脂血等情况可能干扰检测。
3. 防止交叉污染：实验中要使用一次性吸头，避免不同样本之间交叉污染；加样槽等器具也要及时更换或清洗。
4. 试剂保存：试剂盒中的试剂需在规定温度下保存，过期试剂不能使用，不同批号的试剂盒也不能混用。
5. 酶标仪校准：酶标仪需要定期校准，以确保吸光度测量的准确性。