小鼠肝糖原 ELISA 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测小鼠肝糖原的含量。其具体检测原理如下:
- 抗原抗体结合:将小鼠肝糖原特异性抗体预先包被在微孔板上,制成固相抗体。加入标本和标准品后,其中的肝糖原会与包被在微孔板上的抗体特异性结合。
- 形成复合物:再加入 HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体,其会与结合在固相抗体上的肝糖原结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。
- 显色反应:加入底物 TMB(3,3',5,5'- 四甲基联苯胺)后,在 HRP 酶的催化下,TMB 发生显色反应,由无色转化为蓝色,并在酸的作用下进一步转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的肝糖原含量呈正相关。
- 浓度计算:使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过与标准品的 OD 值对比绘制标准曲线,进而计算出样品中肝糖原的浓度。
未开封的试剂盒应存储于 2 - 8℃。使用前试剂盒和样品应置室温平衡 30 分钟后,方可进行检测,实验后未用完的微孔条用自封袋密封保存于 2 - 8℃。
- 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20 - 25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
- 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
- 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值。
- 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
- 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
- 在储存和温育时避免强光直接照射。
- 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
- 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
- 不能使用过期产品。
- 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。