检测原理

试剂盒组成

• 30 倍浓缩洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附。
• 酶标试剂：即 HRP 标记的检测抗体，与结合在固相抗体上的 TBIL 特异性结合，形成可检测的复合物。
• 显色剂 A 液和 B 液：通常 A 液为无色透明液体，B 液为蓝色或其他颜色液体，两者混合后在 HRP 酶的催化下发生显色反应。
• 终止液：一般为硫酸或盐酸等酸性溶液，用于终止酶促反应，使颜色稳定，便于酶标仪检测。
• 标准品：已知浓度的 TBIL 标准品，用于绘制标准曲线，以便对样品中的 TBIL 进行定量分析。
• 封板膜和密封袋：封板膜用于在温育过程中封住反应孔，防止液体蒸发和外界杂质污染；密封袋用于存放试剂盒中的试剂，保持试剂的稳定性。

样本处理及要求

• 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可。或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
• 血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2 - 8℃、1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。上清也可置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
• 组织匀浆：用预冷的 PBS（0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液。称重后将组织剪碎，按 1:9 的重量体积比（如 1g 组织样品对应 9mL PBS，可根据实验需要适当调整）加入 PBS 和蛋白酶抑制剂，于冰上充分研磨。也可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融， 将匀浆液于 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。
• 细胞培养物上清或其它生物标本：1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。需注意，标本溶血会影响 检测结果，溶血标本不宜进行此项检测。

检测范围、灵敏度、特异性和重复性

• 检测范围：不同试剂盒的检测范围有所不同，需详见产品说明书。
• 灵敏度： 检测浓度小于 0.1U/L。
• 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。