主要基于抗原 - 抗体的特异性结合反应以及酶的高效催化作用。其基本步骤和原理如下：

1. 抗原或抗体包被：将已知的抗原或抗体固定在微孔板的表面。

2. 样本孵育：加入待检测样本，若样本中存在目标抗原或抗体，就会与包被在微孔板上的抗体或抗原结合。

3. 洗涤：用洗涤液冲洗微孔板，去除未结合的物质。

4. 酶标记物孵育：加入酶标记的抗体或抗原，它会与结合在微孔板上的目标物结合。

5. 再次洗涤：去除未结合的酶标记物。

6. 底物显色：加入底物，酶催化底物反应，产生可检测的信号，如颜色变化。

7. 终止反应：加入终止液，终止酶促反应。

8. 检测：使用酶标仪检测吸光度值，通过与标准曲线对比，确定样本中目标物的含量。