检测原理

试剂盒组成

• 生物素标记抗体：抗小鼠 Slc18a2 的生物素标记二抗，可与 Slc18a2 蛋白特异性结合，并带有生物素基团，用于与亲和素 - HRP 结合物结合。
• 亲和素 - HRP 结合物：含有亲和素和辣根过氧化物酶，亲和素可与生物素特异性结合，HRP 用于催化底物显色。
• 底物溶液：通常为 TMB 等过氧化物酶底物，在 HRP 作用下会发生颜色变化，如从无色变为蓝色，再在终止液作用下变为黄色。
• 洗涤缓冲液：多为含吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附和背景干扰。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止底物显色反应，使颜色稳定，便于酶标仪读数。
• 说明书：详细介绍了试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项、储存条件等信息。

操作步骤

1. 样本收集与处理：收集小鼠的血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆等样本。血清和血浆样本需离心去除杂质，组织匀浆需按规定方法制备并离心取上清，细胞培养上清直接收集。样本收集后若不能立即检测，需按要求保存于合适温度（如 - 20℃或 - 80℃）。
2. 准备试剂：将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温。按说明书要求稀释生物素标记抗体、亲和素 - HRP 结合物等试剂。
3. 加样：将标准品和处理后的样本加入预包被板的微孔中，每个样本和标准品设复孔，每孔加入规定体积的液体（如 100μL）。轻轻振荡微孔板，使液体充分混合，然后在规定温度（如 37℃）下孵育一定时间（如 1 - 2 小时），让样本中的 Slc18a2 蛋白与包被抗体充分结合。
4. 洗涤：孵育结束后，倒掉微孔中的液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板，一般洗涤 3 - 5 次，每次浸泡一定时间（如 3 - 5 分钟），然后拍干或甩干微孔板，以去除未结合的物质。
5. 加二抗：向每个微孔中加入稀释好的生物素标记抗体，每孔加入适量体积（如 100μL），轻轻振荡混匀，在规定温度下孵育一段时间（如 1 小时），使二抗与结合在包被抗体上的 Slc18a2 蛋白结合。
6. 洗涤：同步骤 4，再次用洗涤缓冲液洗涤微孔板，以去除未结合的二抗和其他杂质。
7. 加亲和素 - HRP 结合物：加入稀释好的亲和素 - HRP 结合物，每孔加入一定体积（如 100μL），轻轻振荡，在规定温度下孵育适当时间（如 30 - 60 分钟），使 HRP 连接到复合物上。
8. 洗涤：重复步骤 4 的洗涤操作，以去除未结合的亲和素 - HRP 结合物。
9. 显色：向每个微孔中加入底物溶液，每孔加入适量体积（如 100μL），轻轻振荡混匀，在避光条件下室温孵育一段时间（如 15 - 30 分钟），观察颜色变化。
10. 终止反应：当颜色变化达到合适程度时，向每孔加入终止液，一般每孔加入 50μL 或其他规定体积，轻轻振荡混匀，终止显色反应。此时溶液颜色会稳定下来。
11. 读数：立即将微孔板放入酶标仪中，在规定的波长下（如 450nm）测定各孔的吸光度值。