检测原理

试剂盒组成

• 预包被板：表面包被有抗小鼠 PGRN 抗体的微孔板。
• 标准品：一系列已知浓度的小鼠 PGRN 标准品，用于制作标准曲线。
• 酶标抗体：酶标记的抗小鼠 PGRN 抗体。
• 样本稀释液：用于稀释样本，使样本中的 PGRN 浓度处于试剂盒的检测范围内。
• 底物溶液：一般为 TMB 等过氧化物酶底物，在酶作用下会发生颜色变化。
• 洗涤缓冲液：多为含吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T），用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止底物显色反应。
• 说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、操作步骤、注意事项等。

操作步骤

1. 样本收集与处理：收集小鼠的血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清等样本。血清和血浆样本需离心分离，组织匀浆需按照特定方法制备并离心取上清，细胞培养上清需离心去除细胞碎片等杂质。样本收集后若不能立即检测，需在合适的温度下保存。
2. 准备试剂：将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温。按说明书要求稀释样本稀释液、酶标抗体等试剂。
3. 加样：将标准品和处理后的样本加入预包被板的微孔中，设复孔，加入规定体积的液体，轻轻振荡微孔板，在规定温度下孵育一定时间。
4. 加酶标抗体：向每个微孔中加入稀释好的酶标抗体，轻轻振荡混匀，在规定温度下孵育一段时间。
5. 洗涤：孵育结束后，倒掉微孔中的液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板，一般洗涤 3 - 5 次，每次浸泡一定时间，然后拍干或甩干微孔板。
6. 显色：向每个微孔中加入底物溶液，轻轻振荡混匀，在避光条件下室温孵育一段时间，观察颜色变化。
7. 终止反应：当颜色变化达到合适程度时，向每孔加入终止液，轻轻振荡混匀，终止显色反应。
8. 读数：立即将微孔板放入酶标仪中，在规定的波长下测定各孔的吸光度值。

注意事项

• 不同批次的试剂盒试剂不可混用，以免影响检测结果的准确性。
• 加样时要使用干净的移液器吸头，避免交叉污染。
• 底物溶液应现用现配，显色反应需在避光条件下进行。
• 实验结束后，应及时清洗仪器和处理废弃物，避免残留试剂对环境造成污染。