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小鼠血管紧张素2(Ang-II)酶联免疫试剂盒
  • 品牌:DUMABIO
  • 产地:上海
  • 型号:48/96T
  • 货号:DM-X6648
  • 价格: ¥1860/盒
  • 发布日期: 2025-04-23
  • 更新日期: 2025-04-23
产品详请
产地 上海
保存条件 2-8°
品牌 DUMABIO
货号 DM-X6648
用途 科研实验
检测方法
保质期 6个月
适应物种
检测限
数量 999
包装规格 48/96T
标记物
样本
应用
是否进口

小鼠血管紧张素2(Ang-II)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断


产品货号:DM-X6648

产品规格:【48T/96T】

检测原理主要有双抗体夹心法和竞争法,具体如下:
  • 双抗体夹心法:
    • 抗体包被:将特异性针对小鼠 Ang - II 的捕获抗体预先包被在微孔板表面。
    • 加样与孵育:往包被好抗体的微孔中依次加入标本、标准品以及 HRP 标记的检测抗体。标本和标准品中的 Ang - II 会与包被在微孔表面的捕获抗体特异性结合,形成抗原 - 抗体复合物。随后加入的 HRP 标记检测抗体也会与 Ang - II 结合,形成捕获抗体 - Ang - II - HRP 标记检测抗体的 “三明治” 结构。
    • 洗涤:通过温育后,洗去未结合的物质,包括未与 Ang - II 结合的 HRP 标记检测抗体、标本或标准品中的其他杂质等,以确保后续检测的准确性。
    • 显色:加入底物 TMB,在过氧化物酶(即 HRP)的催化下,TMB 会转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠 Ang - II 含量呈正相关。
    • 测定与计算:用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)。以所测标准品的 OD 值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,绘制标准曲线,并得到直线回归方程。将样品的 OD 值代入方程,即可计算出样品中小鼠 Ang - II 的浓度。
  • 竞争法:
    • 抗原包被:将 Ang - II 抗原预先包被在微孔板上。
    • 加样与竞争结合:往包被好抗原的微孔中加入标本或标准品,同时加入一定量的生物素标记的 Ang - II。标本或标准品中的 Ang - II 与生物素标记的 Ang - II 会竞争结合包被在微孔表面的 Ang - II 抗体。
    • 洗涤与结合酶标物:洗去未结合的物质后,加入 HRP - 链霉亲和素缀合物(SABC),生物素会特异性地与链霉亲和素结合,形成免疫复合物。
    • 洗涤与显色:再次洗涤后,加入底物 TMB,HRP 催化 TMB 显色,颜色的深浅与样品中的 Ang - II 含量呈负相关,即样品中 Ang - II 浓度越高,结合到包被抗体上的生物素标记 Ang - II 就越少,显色越浅。
    • 测定与计算:用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过与标准曲线对比,计算出样品中 Ang - II 的浓度。


试剂准备:从冰箱中取出试剂盒,室温平衡 30 分钟,确保所有试剂温度一致。同时,按照说明书要求配制所需的洗涤液、标准品稀释液等工作液。
样本准备:根据样本类型(血清、血浆、细胞培养上清等)和说明书要求进行处理,如血清样本需在采集后尽快离心分离,避免溶血。

仪器准备:准备好酶标仪、洗板机(可选)、移液器、吸头、蒸馏水或去离子水等。


ELISA试剂盒操作步骤:
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。



结果分析

绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标,在坐标纸上绘制标准曲线,或使用软件(如 Excel、GraphPad Prism 等)进行线性回归分析,得到标准曲线方程。


注意事项
  1. 本试剂盒仅用于科研实验,严禁用于临床诊断、 或其他非科研用途。使用试剂盒前,请仔细阅读说明书,熟悉操作步骤和注意事项。
  1. 实验过程中,应严格遵守实验室安全操作规程,穿戴好防护服、手套、护目镜等防护用品。试剂盒中的某些试剂可能具有毒性或腐蚀性,如酶标试剂、终止液等,操作时需特别小心,避免接触皮肤、眼睛和口腔。若不慎接触,应立即用大量清水冲洗,并及时就医。
  1. 试剂盒从冰箱取出后,需在室温下充分平衡后再使用,避免因温度差异导致实验误差。不同批次的试剂盒可能存在一定差异,请勿混用不同批次的试剂盒组分,以免影响检测结果的准确性和重复性。

试剂盒选择

· 评估性能指标:查看试剂盒的说明书,关注灵敏度、特异性、重复性等性能指标。灵敏度反映了试剂盒检测低浓度目标物的能力;特异性体现了试剂盒对目标物的识别准确性,避免与其他类似物质发生交叉反应;重复性则通过多次检测同一样本的结果一致性来评估。


上海笃玛生物科技有限公司

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