白介素8受体β(IL8Rβ)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6646

产品规格：【48T/96T】

白介素 8 受体 β（IL8Rβ）酶联免疫试剂盒通常采用双抗体夹心法或双抗原夹心法来检测样本中 IL8Rβ 的水平，以下是具体介绍：

• 双抗体夹心法：
  • 抗体包被：将纯化的抗 IL8Rβ 抗体包被在微孔板表面，形成固相抗体。
  • 加样与孵育：往包被好抗体的微孔中依次加入标本、标准品以及 HRP 标记的抗 IL8Rβ 抗体。标本和标准品中的 IL8Rβ 会与包被在微孔表面的固相抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。随后加入的 HRP 标记抗体也会与 IL8Rβ 结合，形成 “三明治” 结构，即抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。
  • 洗涤：温育后，通过洗涤步骤洗去未结合的物质，包括未与 IL8Rβ 结合的 HRP 标记抗体、标本或标准品中的其他杂质等，以确保后续检测的准确性。
  • 显色：加入底物 TMB，在 HRP 酶的催化下，TMB 会转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 IL8Rβ 含量呈正相关。
  • 测定与计算：用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）。以所测标准品的 OD 值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，并得到直线回归方程。将样品的 OD 值代入方程，即可计算出样品中 IL8Rβ 的浓度。
• 双抗原夹心法：
  • 抗原包被：将纯化的 IL8Rβ 抗原包被在微孔板表面，制成固相抗原。
  • 加样与孵育：往包被好抗原的微孔中依次加入标本、标准品以及 HRP 标记的 IL8Rβ 抗原。标本和标准品中的 IL8Rβ 抗体（如果存在）会与包被在微孔表面的固相抗原特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。随后加入的 HRP 标记抗原也会与抗体结合，形成抗原 - 抗体 - 酶标抗原复合物。
  • 洗涤、显色、测定与计算：后续步骤与双抗体夹心法类似，洗涤去除未结合的物质后，加入底物 TMB 显色，颜色深浅与样品中的 IL8Rβ 抗体含量呈正相关（在这种情况下，检测的是样品中的 IL8Rβ 抗体，而不是 IL8Rβ 本身），通过酶标仪测定 OD 值，并根据标准曲线计算样品中 IL8Rβ 抗体的浓度。

仪器准备：准备好酶标仪、洗板机（可选）、移液器、吸头、蒸馏水或去离子水等。

ELISA试剂盒操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。