小鼠干扰素调节因子 5(IRF5)酶联免疫试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理来检测小鼠样本中的 IRF5 含量。具体如下:
- 包被抗体:将针对小鼠 IRF5 的特异性抗体预包被在酶标板的微孔表面,形成固相抗体。
- 加入样本和标准品:向酶标板孔中加入待检测的小鼠血清、血浆、细胞培养上清液、细胞或组织裂解液等样本以及已知浓度的 IRF5 标准品。经过孵育,样本和标准品中的 IRF5 会与固相抗体发生特异性结合,形成抗原 - 抗体复合物。
- 加入 HRP 标记的检测抗体:洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗小鼠 IRF5 检测抗体。该抗体与结合在固相抗体上的 IRF5 特异性结合,形成 “固相抗体 - IRF5 - HRP 标记检测抗体” 的夹心复合物。
- 显色反应:加入显色底物 TMB,在 HRP 酶的催化作用下,TMB 发生显色反应,由无色变为蓝色。反应一段时间后,加入终止液终止反应,蓝色会转变为黄色。
- 吸光度测定与结果计算:使用酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度值(OD 值)。颜色反应的深浅与样本中 IRF5 的浓度成正比,通过将样本的 OD 值与标准品的 OD 值进行比较,绘制标准曲线,就可以计算出样本中 IRF5 的浓度。
OD 值)。颜色反应的深浅与样本中 IL - 12 p35 的浓度成正比,通过将样本的 OD 值与标准品的 OD 值进行比较,绘制标准曲线,就可以计算出样本中 IL - 12 p35 的浓度。