检测原理

• 包被抗体：将抗小鼠 NFκB2 的特异性抗体包被在酶标板的微孔表面。当含有 NFκB2 的样本加入到微孔中时，样本中的 NFκB2 会与包被抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。
• 加入酶标抗体：洗去未结合的物质后，向微孔中加入酶标记的另一种抗 NFκB2 的特异性抗体。该酶标抗体能够与已经结合在包被抗体上的 NFκB2 结合，形成 “包被抗体 - NFκB2 - 酶标抗体” 的夹心结构。
• 底物显色：再次洗涤去除未结合的酶标抗体后，加入酶的底物。酶标抗体上的酶会催化底物发生化学反应，产生有色产物。在一定范围内，颜色的深浅与样本中 NFκB2 的含量成正比。
• 结果测定：使用酶标仪测定微孔板中溶液在特定波长下的吸光度值。通过与已知浓度的 NFκB2 标准品所绘制的标准曲线进行对比，计算出样本中 NFκB2 的浓度。

试剂盒组成

• 预包被板：已包被抗小鼠 NFκB2 抗体的微孔板。
• 标准品：一系列已知浓度的小鼠 NFκB2 标准蛋白，用于制作标准曲线。
• 酶标工作液：含有酶标记的抗小鼠 NFκB2 抗体的溶液。
• 底物溶液：通常为 TMB 等，可在酶的作用下发生显色反应。
• 终止液：如硫酸溶液，用于终止酶促反应。
• 浓缩洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，使用时需稀释。
• 样本稀释液：用于稀释样本，使样本中 NFκB2 的浓度处于试剂盒的检测范围内。

操作步骤

1. 试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温。按照说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：将标准品、待测样本加入到相应的微孔中，同时设置空白对照孔。轻轻振荡混匀，在规定的温度和时间下孵育，使抗原 - 抗体充分结合。
3. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次，每次浸泡一段时间后拍干，以去除未结合的物质。
4. 加酶标工作液：向每孔中加入适量的酶标工作液，轻轻振荡混匀，在规定条件下孵育，使酶标抗体与抗原 - 抗体复合物结合。
5. 洗涤：重复步骤 4 中的洗涤操作。

注意事项

1. 试剂盒应在有效期内使用，并按照说明书的要求保存。
2. 实验操作应严格按照说明书进行，加样量要准确，避免交叉污染。
3. 洗涤过程要充分，以减少非特异性结合，但要注意避免过度洗涤导致抗原 - 抗体复合物脱落。
4. 显色反应需在避光条件下进行，避免强光照射影响结果。