检测原理

• 包被抗体：将抗小鼠 PCDH15 的特异性抗体包被在酶标板的微孔壁上。当含有 PCDH15 的小鼠样本加入到微孔中时，样本中的 PCDH15 抗原会与包被抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。
• 加入酶标抗体：洗去未结合的物质后，向微孔中加入酶标记的另一种抗 PCDH15 的特异性抗体。该酶标抗体能够与已经结合在包被抗体上的 PCDH15 抗原结合，形成 “包被抗体 - PCDH15 - 酶标抗体” 的夹心结构。
• 底物显色：再次洗涤去除未结合的酶标抗体后，加入酶的底物。酶标抗体上的酶会催化底物发生化学反应，产生有色产物。在一定范围内，颜色的深浅与样本中 PCDH15 的含量成正比。

试剂盒组成

• 预包被板：已包被抗小鼠 PCDH15 抗体的微孔板。
• 标准品：一系列已知浓度的小鼠 PCDH15 标准蛋白，用于制作标准曲线。
• 酶标工作液：含有酶标记的抗小鼠 PCDH15 抗体的溶液。
• 底物溶液：通常为 TMB 等，可在酶的作用下发生显色反应。
• 终止液：如硫酸溶液，用于终止酶促反应。

操作步骤

1. 试剂准备：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温。按照说明书要求配制洗涤液等试剂。
2. 加样：将标准品、待测样本加入到相应的微孔中，同时设置空白对照孔。轻轻振荡混匀，在规定的温度和时间下孵育，使抗原 - 抗体充分结合。
3. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次，每次浸泡一段时间后拍干，以去除未结合的物质。
4. 加酶标工作液：向每孔中加入适量的酶标工作液，轻轻振荡混匀，在规定条件下孵育，使酶标抗体与抗原 - 抗体复合物结合。
5. 洗涤：重复步骤 4 中的洗涤操作。
6. 显色：加入底物溶液，轻轻振荡混匀，在避光条件下孵育，使酶催化底物反应显色。
7. 终止反应：加入终止液，轻轻振荡混匀，终止酶促反应。
8. 读数：在规定时间内，使用酶标仪在特定波长下测定各孔的吸光度值。根据标准曲线计算样本中 PCDH15 的浓度。

注意事项

1. 试剂盒应在有效期内使用，并按照说明书的要求保存，通常需在 2 - 8℃冷藏保存，避免冻结和受热。
2. 实验操作应严格按照说明书进行，加样量要准确，使用加样器并定期校准，以确保加样的准确性和重复性，避免交叉污染。
3. 洗涤过程要充分，以减少非特异性结合，但要注意避免过度洗涤导致抗原 - 抗体复合物脱落。洗涤液应按照说明书要求配制，使用干净的容器和蒸馏水或去离子水。
4. 显色反应需在避光条件下进行，可使用铝箔或黑色塑料袋覆盖酶标板，避免强光照射影响结果。底物溶液应在使用前新鲜配制，避免长时间暴露在空气中。
5. 酶标仪的波长设置要准确，读数时间要严格按照说明书要求，以确保结果的准确性。在测定吸光度值前，应确保酶标板表面清洁，无残留液体和指纹等。