检测原理

试剂盒组成

• 包被板：通常为 96 孔或 48 孔的微孔板，已包被抗小鼠 αFP 抗体。
• 标准品：一系列已知浓度的小鼠 αFP 标准品，用于绘制标准曲线。
• 酶标工作液：含有标记了酶（如辣根过氧化物酶 HRP）的抗小鼠 αFP 抗体。
• 底物溶液：如 TMB（四甲基联苯胺），可在酶的作用下显色。
• 终止液：一般为硫酸溶液，用于终止显色反应。
• 浓缩洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，使用时需按要求稀释。
• 样本稀释液：用于稀释样本，使样本浓度在试剂盒的检测范围内。

操作步骤

1. 试剂和样本准备：从冰箱中取出试剂盒，恢复至室温。按说明书稀释洗涤液、样本稀释液等。采集小鼠的血清、血浆等样本，离心去除杂质，如有需要，可对样本进行适当稀释。
2. 加样：将标准品和待测样本加入到相应的微孔中，同时设置空白对照孔。轻轻振荡混匀，在规定的温度（如 37℃）和时间（通常为 1 - 2 小时）下孵育。
3. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤微孔板数次，每次浸泡片刻后拍干，以去除未结合的抗原和抗体。
4. 加酶标工作液：向每孔加入适量酶标工作液，振荡混匀后，在规定条件下（如 37℃，1 - 2 小时）孵育。
5. 洗涤：重复洗涤步骤，以去除未结合的酶标抗体。
6. 显色：加入底物溶液，轻轻振荡混匀，在避光条件下孵育（如 37℃，15 - 30 分钟），使酶催化底物显色。
7. 终止反应：加入终止液，轻轻振荡混匀，终止显色反应。
8. 读数：使用酶标仪在特定波长下（如 450nm）测定各孔的吸光度值，根据标准曲线计算样本中 αFP 的浓度。

注意事项

1. 试剂盒应在 2 - 8℃保存，避免受热或阳光直射，使用前应检查试剂盒是否在有效期内。
2. 实验操作中要使用准确的移液器，并及时更换吸头，避免交叉污染，加样要准确、快速。
3. 洗涤过程要充分，以去除未结合的物质，但要避免过度洗涤导致信号减弱。洗涤液应使用新鲜配制的，且用高质量的水。
4. 显色反应需在避光条件下进行，可将酶标板放在不透光的盒子中或用铝箔纸包裹。底物溶液应在使用前新鲜配制，避免长时间放置。
5. 酶标仪的波长要正确设置，读数时间要按照说明书要求进行，以确保结果准确。在测定吸光度值前，要确保酶标板表面清洁，无残留液体和污渍。
6. 对于浓度过高或过低的样本，应进行适当的稀释或浓缩，稀释倍数要根据样本的预估浓度和试剂盒的检测范围合理选择，并在报告结果时注明。
7. 实验过程中要注意个人防护，避免试剂接触皮肤和眼睛，如不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。同时，要妥善处理试剂盒中的废弃物，避免对环境造成污染。